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磁分离酶联免疫分析方法在日本血吸虫病诊断中的应用

作　者: 张莉
导　师: 甘璐
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 磁性微球磁分离酶联免疫分析法(MEIA) 日本血吸虫病偶联
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 36次
引　用: 1次
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内容摘要

日本血吸虫病是一种人兽共患的寄生虫病,在我国主要分布于长江中下游地区。诊断工作是控制血吸虫病的关键步骤,常用的诊断方法包括病原学方法和免疫学方法,但病原学方法操作繁琐,而现有免疫学方法存在假阴性率高,灵敏度低等不足。磁分离酶联免疫分析(MEIA)法是一种将磁分离和酶联免疫分析技术相结合,实现对抗原或抗体进行测定的方法。MEIA法由于具有简便快速、灵敏特异、样品用量少、易实现自动化的特点,在免疫分析领域的应用越来越广泛。本研究在对关键原料偶联技术研究的基础上,对磁酶免分析条件进行优化,并将其应用于日本血吸虫病人血清中循环抗体(Sj-Ab)的检测。主要研究内容包括:1)对两种国产超顺磁性微球的性能进行了对比,在对磁球的封闭条件摸索的基础上选择了性能较好的磁球;2)对关键原料的偶联技术进行了研究。在优化条件下用FITC直接标记SEA,用EDC法偶联磁球与抗FITC抗体,按照SMCC法对碱性磷酸酶与二抗进行偶联;3)通过优化关键原料用量、反应时间,显色体系等免疫分析条件,初步建立了检测Sj-Ab的MEIA法,并将其用于实际血清样品的检测。最终,建立了日本血吸虫循环抗体的MEIA检测方法,以SEA-FITC为抗原,磁球-抗FITC抗体为分离固相,单磷酸酚酞为碱性磷酸酶显色底物,血清样品稀释200倍后检测,总测试时间约65min。该方法与甲状腺病人血清无交叉反应,特异性较高,与ELISA法(CV≤18.1%)相比,MEIA法的CV≤8.6%,具有更好的灵敏度和精确度。对513例阳性血清样品和2260例阴性血清样品测定结果表明,与IHA法(37.0%)和DDIA法(27.1%)相比,MEIA法具有更低的假阴性率(0.97%)。本研究建立了MEIA法并将其首次用于人血清中Sj-Ab的检测,该方法有望作为日本血吸虫病的诊断尤其是大规模筛查的备选方法及诊断其他疾病的公共平台。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1. 绪论  10-24
  1.1 磁性微球  10-16
  1.2 酶免分析法在生物医学领域的应用  16-21
  1.3 日本血吸虫病及其诊断的研究现状  21-22
  1.4 本研究的目的和意义  22-24
2. 两种不同来源磁球的性能对比  24-35
  2.1 仪器试剂  24-25
  2.2 实验方法  25-27
  2.3 结果与讨论  27-34
  2.4 本章小结  34-35
3. 偶联技术研究  35-61
  3.1 FITC 与蛋白偶联条件的优化  36-52
  3.2 磁球与抗体的偶联  52-56
  3.3 AP-GAM 的偶联  56-61
4. MEIA 法的建立与实际样品检测  61-73
  4.1 仪器试剂  61-62
  4.2 实验方法  62-64
  4.3 结果与讨论  64-72
  4.4 本章小结  72-73
5. 全文总结与展望  73-75
致谢  75-77
参考文献  77-82

磁分离酶联免疫分析方法在日本血吸虫病诊断中的应用

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