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猪肺炎支原体P97基因抗原决定簇R1区重组表达质粒的构建、表达及活性鉴定

作　者: 刘茂军
导　师: 聂向庭；邵国青；张映
学　校: 山西农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 猪肺炎支原体 P97基因抗原决定簇原核表达活性鉴定
分类号: S852.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 179次
引　用: 3次
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内容摘要

猪肺炎支原体是引起猪气喘病的主要病原。黏附因子是支原体致病的关键因子。本研究根据已报道的序列为参考，设计一对带有EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的引物，并通过引物的定点突变，利用PCR方法从猪肺炎支原体168F485株扩增到其黏附因子P97基因的抗原决定簇R1区。扩增产物经双酶切后，重组到表达载体pET-32a(+)中。重组质粒经酶切鉴定，PCR鉴定和测序，结果证实猪肺炎支原体黏附因子P97基因的抗原决定簇R1区定向插入了质粒pET-32a(+)，且阅读框架正确。将其转化宿主菌BL21(DE3)的感受态细胞，然后经过诱导条件(诱导温度、诱导剂用量和诱导时间)的优化，结果发现在37℃下，IPTG终浓度为0.2mmol／L，诱导4h进行表达，可得到了一分子量约265kDa的融合蛋白，表达量可达约23.3％。通过SDS-PAGE分离的表达产物和有机溶剂提纯的表达产物分别经Western Blot和ELISA检测证实具有抗原反应原性，从而为猪气喘病免疫学检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。

全文目录

摘要  4-5
前言  5-9
  1 Mhp的致病机理  5-6
  2 Mhp黏附因子P97  6-7
  3 Mhp的碱基组组成与密码子使用  7-8
  4 研究目的及意义  8-9
实验内容  9-31
  1 材料  9-10
  2 方法  10-20
  3 结果与分析  20-27
  4 讨论  27-31
结论  31-32
参考文献  32-36
英文摘要  36-37
附录  37

猪肺炎支原体P97基因抗原决定簇R1区重组表达质粒的构建、表达及活性鉴定

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