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肿瘤坏死因子-α单抗干预核转录因子-κB活化对肝癌细胞增殖的抑制作用

作　者: 沈俊俊
导　师: 姚登福
学　校: 南通大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 肝细胞癌核转录因子-κB 肿瘤坏死因子-α 单克隆抗体凋亡细胞周期 RT-PCR Real-Time PCR 蛋白免疫印迹测序
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:肝细胞癌(HCC)的发生、发展是一个多病因、多阶段的过程,与多种细胞因子的异常表达和信号转导密切相关。核转录因子-κB(NF-κB)在HCC的发生、发展过程中起重要作用,特别是肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的NF-κB信号通路活化与肝细胞癌变密切相关,也是肝癌细胞对许多抗肿瘤药物产生耐药性的原因。NF-κB活化干预可能是HCC靶向治疗的途径之一,为此本研究以抗人TNF-α单克隆抗体(TNF-α单抗)对NF-κB活化通路进行干预,观察其对肝癌细胞增殖的影响。方法:在体外培养人HepG2细胞并给予系列浓度的TNF-α单抗,以流式细胞术和AnnexinV-FITC/PI双色标记法分别检测细胞周期时相和细胞凋亡的变化;以巢式RT-PCR扩增NF-κB基因片段并以测序证实,以Real-Time PCR定量检测NF-κB基因的变化;以酶联免疫吸附法定量分析细胞培养液中TNF-α和核蛋白中NF-κB的水平,同时以免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法半定量检测核蛋白NF-κB的表达。结果:单抗作用肝癌细胞后,细胞凋亡率明显增加(P < 0.01),G1期细胞的比例显著增加(P < 0.01),而S期和G2期细胞比例未见明显改变。HepG2细胞总RNA及NF-κB基因的水平均明显高于正常肝细胞(P < 0.01)。单抗作用后,HepG2细胞NF-κB基因的拷贝数明显低于对照组(P < 0.01)。测序分析所扩增的NF-κB基因片段与源序列同源性完全一致。用药后细胞核NF-κB的表达水平和表达强度明显降低(P < 0.01),与培养液中明显降低的TNF-α呈显著正相关(r = 0.89, P = 0.000)。单抗的作用效应呈明显的剂量和时间依赖性,在最初的24 h和高浓度时效应最明显(P < 0.01)。结论:TNF-α单抗能明显抑制NF-κB信号通路的活化,使NF-κB基因表达降低,并可诱导肝癌细胞凋亡,导致细胞周期阻滞在G1期。TNF-α单抗对NF-κB活化干预在体外能抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,有望成为HCC靶向治疗的新途径。

全文目录

英文缩略词表(Abbreviation)  6-9
中文摘要(Abstract in Chinese)  9-11
英文摘要(Abstract in English)  11-13
前言(Introduction)  13-15
材料和方法(Materials and Methods)  15-24
结果(Results)  24-34
讨论(Discussion)  34-40
结论(Conclusions)  40-41
参考文献(References)  41-46
综述(Review)  46-54
综述参考文献(Review References)  54-61
致谢(Acknowledgements)  61-62
附:研究生期间发表论文与参与的研究项目(列题)  62-63

肿瘤坏死因子-α单抗干预核转录因子-κB活化对肝癌细胞增殖的抑制作用

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