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分子靶目标HIF-1α表达规律及与肝癌发生、发展关系研究

作　者: 李月明
导　师: 姚登福
学　校: 南通大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 肝细胞性肝癌 缺氧诱导因子-1α 动态表达 免疫组化 逆转录-聚合酶链反应 DNA测序 蛋白免疫印迹 小干扰RNA
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的肝细胞性肝癌(HCC)的发生是多病因多阶段的发展过程,缺氧诱导因子-1(HIF-1)为异二聚转录因子,其过表达与肝癌生长、血管生成和转移相关,是肿瘤的一个预后因素,其在肝癌发生过程中从早期到癌前损伤期过表达。本研究以大鼠肝癌模型观察肝组织的病理学变化、分子靶目标HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达,同时从基因与蛋白水平上分析了人肝癌及癌周组织中HIF-1α表达与临床病理学特征,并且利用RNA干扰技术,观察HIF-1αsiRNA对人肝癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响。方法以2-乙酰氨基芴喂饲雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠诱发肝细胞癌变,以免疫组织化学法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)观察肝组织内HIF-1α的表达与胞内定位,在癌变过程中以病理学方法观察肝细胞形态学改变,以巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)扩增HIF-1α基因片断,并以DNA测序分析其在癌变过程中的核苷酸序列改变,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,分析二者间的关系。同时收集肝癌患者标本,以IHC和Nested-RT-PCR分析HIF-1α在人肝癌及癌周组织中的表达特征。并且用靶向HIF-1α的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,以ELISA和Western Blot检测HIF-1α和VEGF蛋白的表达水平。结果以肝癌动物的肝癌模型动态观察了分子靶目标HIF-1α及其基因的动态变化。化学诱癌后,临床组织学证实SD鼠肝细胞从出现颗粒样变性、不典型增生到肝细胞性肝癌形成;癌变过程中肝细胞中HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达呈动态进行性增加;HIF-1αmRNA的表达癌变组明显高于对照组和变性组(P < 0.05),所扩增HIF-1α基因片段,与源序列同源性完全一致,未见序列异常和核苷酸变异发生;癌变过程中HIF-1α和VEGF表达呈动态平行升高的趋势,并呈显著正相关。人肝癌组织和癌周组织中HIF-1α均呈过表达,并与核酸代谢旺盛相一致;虽肝癌组织的不同部分HIF-1α表达存在差异,但所扩增HIF-1α基因序列未见异常或核苷酸变异出现。HIF-1αsiRNA转染HepG2细胞后,其HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显下调(P < 0.05)。结论在肝细胞癌变早期HIF-1α及基因表达异常,参与肝癌的发生和发展过程与缺氧环境有关;其变化与VEGF平行,并癌变不同时期的基因扩增片段中未见核苷酸变异发生;应用RNAi技术可抑制HIF-1α表达,提示HIF-1α基因可能成为肝癌治疗的分子靶目标。

全文目录


英文缩略词表(Abbreviation)  6-8
中文摘要(Abstract in Chinese)  8-10
英文摘要(Abstract in English)  10-12
前言(Introduction)  12-14
材料和方法(Materials and Methods)  14-21
结果(Results)  21-28
讨论(Discussion)  28-32
结论(Conclusions)  32-33
参考文献(References)  33-38
综述(Review)  38-46
综述参考文献(References)  46-54
致谢(Acknowledgements)  54-55
附:研究生期间发表论文与参与的研究项目(列题)  55-56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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