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海地瓜（Acaudina Molpadioidea）胶原蛋白水解物中血管紧张素转移酶抑制肽的研究

作　者: 赵元晖
导　师: 曾名勇
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产品加工与贮藏工程
关键词: 海地瓜胶原蛋白 ACE抑制肽复合酶解分离纯化
分类号: TQ464.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

本文研究了海地瓜体壁胶原蛋白的提取方法,单酶和复合酶水解海地瓜胶原蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性肽的工艺条件以及ACE抑制活性肽的纯化及其部分特性。采用酸法、酶法、热水浸提法从海地瓜体壁中提取胶原蛋白,提取率分别为4.72%,29.30%,53.50%。从实验结果可看出热水浸提法提取率最高,酸法提取率最低。酶促溶法的提取率虽然不低,但提取工艺相对繁琐。因此本实验选择热水浸提法制备海地瓜胶原蛋白。采用硫酸铵沉淀法成功地从猪肺中提取得到高活力的ACE酶。即以新鲜的猪肺为原料,在低温条件下用硼酸缓冲液浸提,得到的粗酶液再通过硫酸铵分级沉淀和凝胶过滤等方法进一步纯化,纯化后的ACE酶液比活力为63.36u。以海地瓜胶原蛋白为原料,选用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、3942中性蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、Alcalase 2.4L蛋白酶进行水解。以单酶水解产物的IC50值为评价指标,确定了菠萝蛋白酶、Alcalase 2.4L蛋白酶、Ⅰ型胶原酶作目标酶。通过正交实验,确定了这三种单酶的最适水解条件。结果表明:菠萝蛋白酶最适水解条件为:45℃,pH4.5,底物浓度1.0%,加酶量2000U/g,4h;Alcalase 2.4L蛋白酶最适水解条件为:55℃,pH7.4,底物浓度1.5%,加酶量2000U/g,2h;Ⅰ型胶原酶最适水解条件为:37℃,pH7.4,底物浓度1.0%,加酶量1500U/g,4h。在单酶和正交实验的基础上,采用复合酶进行水解实验,得到了最适复合酶水解工艺条件:先采用菠萝蛋白酶进行水解,再用Alcalase 2.4L酶水解,最后用Ⅰ型胶原酶水解。复合酶解工艺中,这三种酶的水解液分别经过10KDa、5KDa、1KDa的膜超滤,优化了复合酶解工艺,得到了具有更高的ACE抑制活性的组分,其水解液的IC50值为0.35mg/ml。利用SP Sephadex C-25阳离子交换、Sephadex G-15凝胶柱层析、两次反相高压液相色谱层析对复合酶水解产物进行分离纯化,得到高活性的ACE抑制肽,其IC50值为0.0142 mg/ml。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-8
0 前言  8-22
  0.1 海地瓜的食用与药用价值  8-10
  0.2 胶原蛋白  10-15
  0.3 高血压与血管紧张素转换酶（ACE）的关系  15-16
  0.4 食源性ACE 抑制活性肽(ACEIP)  16-21
  0.5 本文研究目的、意义和内容  21-22
1 海地瓜胶原蛋白的提取  22-27
  1.1 材料与方法  22-24
  1.2 结果与讨论  24-26
  1.3 本章小结  26-27
2 ACE 酶的提取及活性检测  27-33
  2.1 材料与方法  27-30
  2.2 结果与分析  30-32
  2.3 讨论  32
  2.4 本章小结  32-33
3 海地瓜胶原蛋白酶解液的制备  33-46
  3.1 材料与方法  33-39
  3.2 结果与分析  39-44
  3.3 讨论  44-45
  3.4 本章小结  45-46
4 ACE 抑制活性肽的纯化及其部分特性的研究  46-55
  4.1 实验材料与仪器  46-47
  4.2 实验方法  47-48
  4.3 实验结果  48-53
  4.4 讨论  53-54
  4.5 本章小结  54-55
5 总结  55-57
参考文献  57-64
致谢  64

海地瓜（Acaudina Molpadioidea）胶原蛋白水解物中血管紧张素转移酶抑制肽的研究

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