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三种核苷类抗病毒药物对大鼠原代肝细胞的毒性研究

作　者: 贾珍容
导　师: 王大菊
学　校: 华中农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 肝细胞原代培养 齐多夫定 阿昔洛韦 更昔洛韦 天冬氨酸氨基转移酶 丙氨酸氨基转移酶 乳酸脱氢酶 尿素氮
分类号: S859
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


本试验通过建立大鼠肝细胞原代培养体系，评价三种核苷类抗病毒药物对原代大鼠肝细胞的毒性作用。 分别用胶原酶和胰酶灌流获取大鼠肝细胞，通过台盼蓝拒染试验测定细胞活力并计数，进行原代培养并观察其形态变化，采用噻唑蓝（MTT）试验测定肝细胞的活性。结果显示，胶原酶分离的肝细胞数量是胰酶的2.4倍，细胞活力是胰酶的0.3倍，细胞原代培养时，活性和贴壁效果远不及胰酶。表明胶原酶分离的大鼠肝细胞虽然数量多，但是活力低，而胰酶分离的大鼠肝细胞数量虽然不及胶原酶，但是活力高，用于评价三种核苷类抗病毒药物对肝细胞的毒性作用。 以Dulbecco’s modified Eagle’s medium（DMEM）培养液调整肝细胞密度为3×105个／ml，将肝细胞分为药物组、阳性对照组、阴性对照组和空白对照组。肝细胞置37℃、5％CO2培养箱中培养4h，弃上清。药物组分别加入齐多夫定（AZT）浓度为10、5、3．3、2、0.4和0.08mmol／L，阿昔洛韦（ACV）浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.125和0.025mmol／L，更昔洛韦（GCV）浓度为10、4、2、1、0.2和0.04mmol／L。阳性对照组加入四氯化碳（CCl4）浓度为10、2和0.5mmol／L。阴性对照组加入含1％二甲基亚砜（DMSO）的DMEM培养液。空白对照组加入DMEM培养液。分别于加样后6、12和24h检测细胞活性；并于加样6和12h取培养上清液测定天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）和尿素氮（BUN）的含量，于加样12h将细胞进行苏木素—伊红（HE）染色，观察细胞形态变化。结果显示，与阴性对照组相比，CCl4浓度高于2mmol／L时，在各时间点能显著降低细胞活性，显著增加AST、ALT和LDH的释放量，显著降低BUN的合成功能，浓度为10mmol／L时能引起细胞变小、核浓缩和核碎裂，浓度为2mmol／L时能引起细胞核浓缩。AZT浓度高于3.3

全文目录


摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
缩略语表  10-11
1 前言  11-14
  1.1 研究背景  11-13
  1.2 目的和意义  13
  1.3 研究内容与目标  13-14
2 材料与方法  14-18
  2.1 实验动物  14
  2.2 药物  14
  2.3 主要试剂  14
  2.4 主要仪器设备  14
  2.5 溶液的配制  14-16
  2.6 大鼠肝实质细胞分离方法的建立  16-17
    2.6.1 大鼠肝细胞的分离  16
    2.6.2 大鼠肝细胞计数  16
    2.6.3 大鼠肝细胞活力和纯度的计算  16-17
    2.6.4 大鼠肝细胞的原代培养  17
    2.6.5 细胞活性试验  17
  2.7 三种药物的肝细胞毒性试验  17-18
    2.7.1 肝细胞分组  17
    2.7.2 细胞毒性试验  17
    2.7.3 细胞形态的观察  17-18
    2.7.4 数据处理  18
3 结果与分析  18-36
  3.1 肝细胞分离方法的比较  18-20
    3.1.1 肝细胞数量的比较  18
    3.1.2 肝细胞活力的比较  18
    3.1.3 肝细胞原代培养的比较  18-19
    3.1.4 肝细胞生长活性试验的比较  19-20
  3.2 三种药物对肝细胞的影响  20-36
    3.2.1 齐多夫定对肝细胞活性的影响  20-21
    3.2.2 阿昔洛韦对肝细胞活性的影响  21
    3.2.3 更昔洛韦对肝细胞活性的影响  21
    3.2.4 齐多夫定对主要生化指标的影响  21
    3.2.5 阿昔洛韦对主要生化指标的影响  21-22
    3.2.6 更昔洛韦对主要生化指标的影响  22-32
    3.2.7 阳性对照组、阴性对照组和空白对照组细胞形态观察  32-33
    3.2.8 齐多夫定对肝细胞形态的影响  33-34
    3.2.9 阿昔洛韦对细胞形态的影响  34-35
    3.2.10 更昔洛韦对细胞形态的影响  35-36
4 讨论  36-41
  4.1 大鼠肝细胞分离方法的确定  36-37
  4.2 三种核苷类抗病毒药物对肝细胞的毒性评价  37-41
    4.2.1 药物溶媒和浓度的确定  38
    4.2.2 肝细胞毒性评价指标的确定  38-39
    4.2.3 药物对细胞活性的影响  39
    4.2.4 药物对主要生化指标的影响  39-40
    4.2.5 药物对细胞形态的影响  40-41
5.结论  41-42
6 综述  42-48
  6.1 大鼠肝细胞分离与培养研究进展  42-43
  6.2 原代大鼠肝细胞模型在药理学、毒理学中的应用  43-45
  6.3 核苷类抗病毒药物研究进展  45-46
  6.4 核苷类抗病毒药物作用机理、应用及毒副作用  46-48
参考文献  48-55
致谢  55-56
附录  56-89

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医药物学
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