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鸡小肠离体培养条件优化及在饲料磷效价评定中的应用研究

作　者: 徐运杰
导　师: 方热军
学　校: 湖南农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 肉仔鸡磷外翻肠囊细胞活性乳酸脱氢酶中草药提取物
分类号: S816.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 21次
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内容摘要

本试验用外翻肠囊法初步探讨了不同培养温度、不同培养时间、培养液不同pH值和磷浓度对离体培养鸡小肠的磷吸收和肠粘膜细胞活性的影响,并进一步研究了用外翻肠囊法评定饲料有效磷的可行性和中草药添加剂对离体培养鸡小肠的磷吸收和肠粘膜细胞活性的影响。本研究包括三个试验。试验一离体鸡小肠培养条件优化选用30日龄、体重468.64±31.74g的三黄公鸡132只,采用4个单因子完全随机试验和1个3×3正交试验,研究了不同培养温度、培养时间、培养液不同pH值和磷浓度对生长肉鸡离体小肠磷吸收和肠粘膜细胞活性的影响。结果表明：①在0～60min,培养液中乳酸脱氢酶活力上升较缓慢,60min后上升幅度较快。②培养温度在30℃～38℃时,肠囊磷吸收量与温度呈正相关(R2=0.9465),38℃时肠囊的磷吸收量显著高于30℃和34℃时肠囊的磷吸收量(P<0.05),42℃时,肠囊的磷吸收量极显著降低(P<0.01)；培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性与培养温度呈线性关系,培养温度在30℃～38℃时,培养液中LDH活性没有明显差异(P>0.05),但42℃时培养液中LDH活性极显著高于其它处理(P<0.01)。③培养液磷含量在50μg／ml～200μg／ml时,肠囊的磷吸收量与磷含量呈正相关(R2=0.8998),但当磷含量增加到400μg／ml,十二指肠肠囊和空肠肠囊的磷吸收量开始降低；磷吸收率与培养液磷含量之间呈负相关(R2=0.8439),不同处理之间差异极显著(P<0.01)。④pH 5.0～7.0时,肠囊的磷吸收量线性增加,pH8.0时,肠囊的磷吸收量降低,与pH5.0比较,pH7.0时,肠囊的磷吸收量极显著增加(P<0.01)；培养液中LDH活力受pH影响较大,pH5.0～7.0之间时,培养液中LDH活性线性降低,pH7.0时,培养液中LDH活性都极显著低于pH5.0时LDH活性(P<0.01),与pH6.0之间没有明显差异(P>0.05),当培养液pH升高到8.0时,培养液中LDH活性反而增加。综合分析,以培养液中LDH活力变化和肠囊磷吸收量变化为判断指标,肉仔鸡外翻肠囊的适宜培养时间约为40～50min适宜培养温度以36℃～38℃为宜；适宜pH范围是6.0～7.0；以三黄肉仔鸡小肠为试验材料,用外翻肠囊法评定饲料磷吸收速率时,培养液中磷含量不要超过200gg／ml,用外翻肠囊法评定饲料磷生物学效价时,培养液中磷含量以50μg／ml左右为宜。试验二鸡离体小肠评定植物性饲料磷生物学效价的研究本试验研究了鸡离体小肠对玉米、豆粕、麦麸、统糠和菜粕5种植物性饲料磷的体外吸收率,旨在探讨用外翻肠囊法评定养分生物学效价的可行性。选用30只40日龄体重相近的三黄公鸡,随机分成5个处理,每个处理6个重复,每个重复1只鸡。每只鸡的空肠前段制成两个肠囊,40℃条件下培养50min,分别测定肠囊对不加植酸酶和加植酸酶两种不同处理植物性饲料中磷的吸收率。结果表明：体外吸收率与真消化率之间虽然相关性较好。试验三中草药提取物对鸡离体小肠磷吸收和细胞活性的影响本试验主要研究了中草药提取物对鸡离体小肠磷吸收和肠黏膜细胞活性的影响,旨在初步探索中草药对饲料磷吸收利用的影响机制。采用单因子完全随机设计,36只40日龄体重相近的三黄公鸡随机分成6个组,每组6个重复,每个重复1只鸡。测试了白头翁、马齿苋、大青叶和秦皮四味中草药的单一提取物及其组合方剂对磷吸收和肠黏膜细胞活性的影响。结果表明：大青叶和秦皮对磷的吸收和肠黏膜细胞活性有负作用,白头翁、马齿苋和混合方剂对磷的吸收和肠黏膜细胞活性有正效应。试验结论：不同中草药提取物对鸡离体小肠肠黏膜细胞活性和磷吸收有不同的影响,但具体原因还有待进一步研究。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-13
前言  13-14
第一章文献综述  14-35
  1 磷的生物学功能及吸收代谢  14-17
    1.1 磷与生命化学  14-15
    1.2 磷的吸收与代谢  15-17
  2 常用饲料磷生物学效价的评定方法  17-20
    2.1 相对效价法  17-18
    2.2 绝对效价法  18-20
    2.3 体外法  20
  3 外翻肠囊法的研究进展  20-33
    3.1 外翻肠囊体外培养的条件  21-23
    3.2 常用的培养缓冲液  23-26
    3.3 pH调整液  26
    3.4 抗生素溶液  26-27
    3.5 细胞活性的评价  27-28
    3.6 外翻肠囊法在物质吸收机理研究中的应用  28-33
  4 目前存在的问题  33-34
  5 本论文的目的与意义  34-35
第二章试验研究  35-71
  试验一鸡离体小肠培养条件优化研究  35-60
    1 材料与方法  35-40
      1.1 试验材料  35-37
      1.2 外翻肠囊的制作  37
      1.3 试验设计  37-38
      1.4 样品的采集与分析  38-40
      1.5 数据分析  40
    2 结果与分析  40-53
      2.1 培养时间对培养液中LDH活力的影响  40-41
      2.2 培养温度对离体小肠磷吸收的影响  41-42
      2.3 培养温度对培养液中LDH活力的影响  42-43
      2.4 培养液磷含量对离体鸡小肠磷吸收的影响  43-44
      2.5 培养液磷含量对离体鸡小肠磷吸收率的影响  44-45
      2.6 培养液pH值对离体鸡小肠磷吸收的影响  45-46
      2.7 培养液pH值对培养液中LDH活力的影响  46-48
      2.8 不同肠段对磷吸收和培养液中LDH活力的影响  48
      2.9 不同因素及其水平对培养液LDH活性的影响  48-50
      3.0 不同因素及其水平对离体鸡小肠磷吸收量的影响  50-53
    3 讨论  53-59
      3.1 培养时间对培养液中LDH活力的影响  53-55
      3.2 培养温度对离体鸡小肠磷吸收的影响  55-56
      3.3 肠段和培养液磷含量对离体鸡小肠磷吸收的影响  56-57
      3.4 培养液pH值对离体鸡小肠磷吸收的影响  57-58
      3.5 培养液中各成分的作用  58-59
    4 结论  59-60
  试验二离体鸡小肠评定植物性饲料磷生物学效价的可行性研  60-66
    1 材料与方法  60-62
      1.1 试验材料  60-61
      1.2 肠囊的制作  61
      1.3 试验方法  61
      1.4 磷吸收率的计算  61-62
      1.5 数据分析  62
    2 结果与分析  62-64
    3 讨论  64
    4 结论  64-66
  试验三中草药提取物对离体鸡小肠磷吸收和细胞活性的影响  66-71
    1 材料与方法  66-68
      1.1 试验材料  66-67
      1.2 肠囊的制作  67
      1.3 试验方法  67
      1.4 磷吸收与LDH活力的分析  67-68
      1.5 数据分析  68
    2 结果与分析  68-69
      2.1 中草药提取物对离体鸡小肠磷吸收的影响  68-69
      2.2 中草药提取物对培养液LDH活性的影响  69
    3 讨论  69-70
    4 结论  70-71
第三章总体结论  71-72
第四章创新点与存在的问题  72-73
参考文献  73-93
附录  93-95
致谢  95-96
作者简介  96

鸡小肠离体培养条件优化及在饲料磷效价评定中的应用研究

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