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高原鼠兔组织乳酸脱氢酶同工酶的特异性

作　者: 饶鑫峰
导　师: 魏登邦
学　校: 青海大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 高原鼠兔低氧精子特异型乳酸脱氢酶实时荧光定量PCR
分类号: S812.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

高原鼠兔(Ochotona curzoniae)是青藏高原高海拔地区特有的物种,为了研究其对高原环境的适应机制,用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察心、肝、肺、肾、脑、骨骼肌和睾丸组织乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)同工酶谱,我们发现,在繁殖季节,高原鼠兔LDH同工酶谱在各组织中都表现出六条带,与睾丸和精子中的同工酶谱完全一样。而平原SD大鼠的体细胞组织中只有五条带,睾丸中却有六条带,其中从点样孔往下第三条为LDH-C4。我们推测,Ldh-c基因不仅在高原鼠兔精子中表达,而且在体细胞同样表达。为证明这一假设的可靠性,我们克隆了Ldh-c全长序列,分析了Ldh-c在体细胞中是否表达,以及海拔变化对睾丸中Ldh-c基因表达的影响。用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察心、肝、肺、肾、脑、骨骼肌和睾丸LDH同工酶谱;用分子及生物信息学方法测定并分析高原鼠兔Ldh-c的cDNA序列;用Real-time PCR比较高原鼠兔睾丸内Ldh-c在不同海拔mRNA水平的表达。结果:同工酶谱显示,高原鼠兔各组织中均表现出位置一致的6条带。高原鼠兔Ldh-c基因全长1 624bp,包括106bp的5′端非编码区,519bp的3′端非编码区和一个999bp的编码区。开放式阅读框架起始于107位核苷酸起始密码子ATG,终止于1 105位核苷酸TAA终止密码子。高原鼠兔Ldh-c基因的编码区序列与牛,人,大鼠,小鼠分别有84.98,86.09,76.38和76.88%的同源性。玉树鼠兔睾丸中的Ldh-c在mRNA水平上的表达显著低于海北鼠兔(P<0.05),同时在体细胞组织中并未发现Ldh-c基因表达。以上结果表明,高原鼠兔Ldh-c基因并不在体细胞组织中表达。体细胞组织和睾丸中表达一致的六条带仍有待进一步研究。尽管高原鼠兔是一种对高原环境高耐受性的动物,低氧对其生理仍有一定的影响。我们推测,随着海拔的升高,高原鼠兔Ldh-c基因的表达受抑制,抑制精子获能,从而对其生殖造成影响。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章引言  9-21
  1 高原鼠兔及其对高原低氧环境的适应  9-16
    1.1 高原鼠兔的生物学特征及其生境特点  9-10
    1.2 高原鼠兔对高原低氧环境的适应  10-16
      1.2.1 高原鼠兔肺对高原低氧环境的适应  10-12
      1.2.2 高原鼠兔血液对高原低氧环境的适应  12-14
      1.2.3 高原鼠兔骨骼肌对高原低氧环境的适应  14
      1.2.4 高原鼠兔其他方面对高原低氧环境的适应  14-15
      1.2.5 高原鼠兔对高原低氧环境的分子适应  15-16
  2 精子特异性乳酸脱氢酶研究进展  16-21
    2.1 LDH 同工酶理化性质研究  16-17
    2.2 LDH-C4 免疫学性质及细胞定位  17-18
    2.3 Ldh-c 基因进化与调控  18-19
    2.4 LDH-C4 与精子获能  19-20
    2.5 低氧对LDH-C4 的影响  20-21
第二章高原鼠兔组织乳酸脱氢酶同工酶的特异性  21-29
  1 材料与方法  21-22
    1.1 实验动物  21-22
    1.2 实验方法  22
      1.2.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳  22
  2 结果与分析  22-27
    2.1 高原鼠兔乳酸脱氢酶同工酶谱  22-24
    2.2 高原鼠兔、高原鼢鼠和SD 大鼠血液乳酸脱氢酶同工酶谱比较  24
    2.3 高原鼠兔和SD 大鼠脑、肺和睾丸乳酸脱氢酶同工酶谱比较  24-25
    2.4 高原鼠兔、高原鼢鼠和SD 大鼠LDH 同工酶的迁移率  25-26
    2.5 高原鼠兔乳酸脱氢酶同工酶的热稳定性  26-27
  3 讨论  27-29
第三章高原鼠兔乳酸脱氢酶基因Ldh-c 测序及分析  29-40
  1 材料与方法  29-33
    1.1 实验动物  29-30
    1.2 实验方法  30-33
      1.2.1 RNA 提取  30
      1.2.2 第一链cDNA 合成  30-31
      1.2.3 RACE 扩增  31-32
      1.2.4 琼脂糖凝胶电泳  32
      1.2.5 切胶回收  32
      1.2.6 TA 克隆  32-33
      1.2.7 分析方法  33
  2 结果与分析  33-40
    2.1 高原鼠兔Ldh-c cDNA 序列及分析  33-35
    2.2 高原鼠兔LDH-C 氨基酸序列分析  35-36
    2.3 高原鼠兔LDH-C 氨基酸二三级结构及功能基序预测  36-40
第四章不同海拔高原鼠兔Ldh-c 基因表达差异  40-47
  1 材料与方法  40-44
    1.1 实验动物  40
    1.2 实验方法  40-44
      1.2.1 RNA 的抽提  41
      1.2.2 RNA 质量检测  41-42
      1.2.3 用样品的RNA 进行cDNA 合成  42-43
      1.2.4 PCR 反应  43-44
  2 结果与分析  44-45
  3 讨论  45-47
结论  47-48
参考文献  48-54
致谢  54-55
个人简介  55

高原鼠兔组织乳酸脱氢酶同工酶的特异性

内容摘要

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