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青藤碱对人外周血CD4～+T细胞ERK1/2及TNF-α表达的体外研究

作　者: 王中华
导　师: 王毅
学　校: 南华大学
专　业: 泌尿外科
关键词: 青藤碱环孢菌素A CD4~+T细胞磷酸化ERK1/2 肿瘤坏死因子-α 免疫抑制
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的：通过人外周血CD4⁺T淋巴细胞增殖模型的体外实验，检测盐酸青藤碱（Alkaloid Sinomeuine SIN）对人外周血CD4⁺T淋巴细胞磷酸化的ERK1／2蛋白表达及TNF-α表达的体外影响，研究SIN对人外周血CD4⁺T淋巴细胞免疫抑制作用及效应，进一步探讨SIN对人T淋巴细胞免疫抑制作用的细胞学及分子生物学机制，为临床应用SIN进行器官移植免疫治疗提供理论依据。方法：在衡阳市中心血站抽取3个健康人肘静脉血50ml，肝素（10U／ml）抗凝。用淋巴细胞分离液从血液标本中分离PBMC，并制成PBMC悬液。通过免疫磁珠分离法从PBMC悬液中分选CD4⁺T细胞。将CD4⁺T细胞用10％FCS RPMI-1640完全培养液在37℃、5％CO₂条件下培养。CD4⁺T细胞经终浓度为5μg／ml的PHA和终浓度为100U／ml的IL-2扩增7天后，将扩增后的细胞用PBS洗3遍，继续培养（细胞培养液中不含rIL-2和PHA）1天，细胞接种于中方瓶，生长至70％-80％时（对数生长期），各组细胞培养液中加入终浓度1μg／ml的鼠抗人CD3单克隆抗体，继续培养6小时后，细胞的处理分二部分：1、Western blot法检测相同浓度不同作用时间的SIN对人外周血CD4⁺T细胞p-ERK1／2蛋白表达水平：1)0min组：细胞培养液中加入不含任何药物的与实验组等量的SIN稀释液；2)细胞培养液中加入终浓度为200μmol／L的SIN溶液，分别作用15min，30min，1h，1.5h，2h；2、ELLSA法检测TNF-α表达水平：1)空白对照组：细胞培养液中加入不含任何药物的与实验组等量的SIN稀释液；2)CsA组：细胞培养液中加入终浓度为50ng／ml的CsA溶液；3)低浓度SIN组：细胞培养液中加入终浓度为10μ mol／L的SIN溶液；4)中浓度SIN组：细胞培养液中加入终浓度为200μ mol／L

全文目录

一、主要缩略语中英文索引(English Abbreviations Induces)  6-7
二、中文摘要(Chinese Abstract)  7-9
三、英文摘要(English Abstract)  9-11
四、正文(Text)  11-38
  第一章(Chapter 1) 前言(Introduction)  11-16
  第二章(Chapter 2) 材料和方法(Materials and Methods)  16-24
  第三章(Chapter 3) 结果(Results)  24-30
  第四章(Chapter 4) 讨论(Discussion)  30-37
  第五章(Chapter 5) 结语(Conclusions)  37-38
五、参考文献(References)  38-42
六、综述(Review)  42-52
七、读研期间发表的论文(Theses)  52-53
八、致谢(Acknowledgements)  53

青藤碱对人外周血CD4～+T细胞ERK1/2及TNF-α表达的体外研究

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