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东亚钳蝎毒素BmαTX14的基因组克隆、真核表达纯化及其功能的初步研究

作　者: 吕猛
导　师: 李文鑫
学　校: 武汉大学
专　业: 微生物学
关键词: 东亚钳蝎 蝎毒素 BmαTX14 基因组织结构 毕赤酵母 真核表达
分类号: Q516
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


蝎毒素是一类由20-90个氨基酸构成的小分子多肽。这类小肽一般含3或4对二硫键,可以选择性地与动物可兴奋细胞膜上的钠、钾、钙、氯离子通道结合,影响离子通道的状态,成为研究离子通道生理作用和功能定位的重要工具之一。此外,在我国中医药学中,用全蝎镇痉、熄风、通络止痛、和攻毒散结己有悠久的历史。 根据从蝎毒腺cDNA文库中,分离得到的基因bmatx14的cDNA序列(447bp)设计引物,通过PCR方法,从东亚钳蝎基因组中扩增到由855bp组成的bmatx14的全长基因。序列分析表明bmatx14基因在编码信号肽的第16个氨基酸残基Gly的密码子的第一个碱基(G)后有一个408bp的内含子。其基因组结构分析表明:富含AT,含量达73.5%,明显高于外显子(57.6%);5’、3’剪接位点序列分别为5’-AG|gtaaga-3’、5’-tgacag|GA-3’;在3’剪接受体位点上游74个碱基处含有一个剪接分枝点序列元件:5’-taat-3’。bmatx14基因组织结构具有典型的α型Na~+通道毒素的特征。 蝎毒成分复杂,难以纯化,而且单体成分含量较低,因而蝎毒素的研究和应用受到了一定的限制。本研究利用毕赤酵母真核表达系统建立了蝎毒素的高效真核表达、纯化体系,纯化得到的重组BmαTX14经初步功能研究,表现出α型Na~+通道毒素特性。将蝎毒bmatx14成熟肽cDNA扩增产物克隆至真核表达载体pPIC9K中,并在载体信号肽与成熟肽之间设计组氨酸标签(His-tag)。构建的重组表达载体转化毕赤酵母菌株GS115,多拷贝转化子经G418梯度筛选后,能够

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中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 蛋白质 > 蛋白质的一级结构
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