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BMP2和TGFβ3双基因真核表达载体的构建与鉴定
作 者: 马小松
导 师: 刘金钊
学 校: 青岛大学
专 业: 运动医学
关键词: 骨形态发生蛋白2 转化生长因子β3 真核表达载体
分类号: R87
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 14次
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内容摘要
目的本实验旨在扩增BMP2和TGFβ3基因,并构建含有BMP2和TGF-β3的双基因真核表达载体p工ERS-BMP2-TGFβ3,为研究双基因共转染间充质干细胞及其在体内的表达情况和可能存在的协同效应奠定基础。方法首先,用PCR方法从质粒pGEMT/BMP2中扩增出BMP2基因全长,并将其连入双基因真核表达载体pIRES,筛选出阳性重组质粒pIRES-BMP2;其次,用RT-PCR的方法从人胚胎组织扩增出TGFβ3基因全长,将TGFβ3基因连入质粒pIRES-BMP2;用酶切的方法筛选出阳性重组质粒pIRES-BMP2-TGFβ3,并进行测序鉴定。结果成功的克隆出BMP2和TGFβ3基因,并将其连接到目的载体pIRES中,双酶切和质粒测序证实连接正确,且基因的开放阅读框架正确,pIRES-BMP2-TGFβ3双基因真核表达载体构建成功。结论利用PCR, DNA重组等分子生物学技术,成功构建了双基因真核表达载体pIRES-BMP2-TGFβ3,为进一步研究双基因共转染间充质干细胞,探讨其在体内的表达情况,对间充质干细胞成骨分化的影响及可能存在的协同效应奠定基础。
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全文目录
中文摘要 2-3 Abstract 3-5 引言 5-6 第一章 试剂及仪器 6-8 1.1 质粒和菌株 6 1.2 试剂 6 1.3 仪器 6-7 1.4 常用试剂的配制 7-8 第二章 实验方法 8-16 2.1 调取TGFβ 3基因 8-10 2.2 调取BMP2基因 10 2.3 构建pIRES-BMP2质粒 10-14 2.4 构建pIRES-BMP2-TGFβ3 14-15 2.5 重组质粒序列测定 15-16 第三章 结果 16-19 3.1 BMP2基因的PCR产物鉴定 16 3.2 TGFβ3基因的PCR产物鉴定 16 3.3 重组质粒pIRES-BMP2的酶切鉴定 16 3.4 重组质粒pIRES-BMP2-TGFβ3的酶切鉴定 16-17 3.5 重组质粒pIRES-BMP2-TGFβ3的测序 17-19 第四章 讨论 19-22 第五章 结论 22-23 参考文献 23-25 综述 25-36 综述参考文献 32-36 攻读学位期间的研究成果 36-37 致谢 37-38
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中图分类: > 医药、卫生 > 特种医学 > 运动医学
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