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桑叶中降血糖成分1-脱氧野尻霉素及其类似物的研究

作　者: 王尉
导　师: 曹学丽
学　校: 北京工商大学
专　业: 生物化工
关键词: 桑叶 1-脱氧野尻霉素 分离纯化 结构鉴定 降血糖活性
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


桑叶是一种传统的中药,主要含有黄酮类、多糖类、生物碱类等化合物。其具有多种生物活性及临床应用,主要用于治疗糖尿病,高血压等病症。以1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,简称DNJ)为代表的多羟基生物碱作为桑叶中重要的一类降血糖成分,得到了国内外学者的高度关注。但是目前有关桑叶降血糖方面的研究,大部分集中在对桑叶粗提取物的活性试验研究方面,鲜有对单体成分进行活性研究的报道,尤其是对DNJ类似物的研究更是少见。本文以桑叶水提物为研究对象,主要采用经济而传统的离子交换法分离得到7种单体成分,采用降血糖体外活性试验模型对其降血糖活性分别进行了研究,并对可能的降血糖机理进行了初步的探讨。1、使用亲水性相互作用色谱柱,建立了对1-脱氧野尻霉素及其类似物的HPLC-ELSD分析方法。该方法较衍生化方法简便,快捷,可对桑叶样品进行快速的定性和定量分析。2、以蒸馏水为溶剂,采用超声波辅助提取法对桑叶样品进行提取,通过反复的离子交换树脂分离和最后的Sephadex凝胶色谱纯化,共得到七种单体成分。经HPLC-MS和NMR结构鉴定,分别为DNJ ,及其三个类似物2-O-α-D-galactopyranosyl-1-deoxynojirimycin , fagomine , 1,4-dideoxy-1,4-imino- (2-O-β-D-glucopyranosyl)-D-arabinitol以及myo-inositol和两种未确定结构的单体物质。3、建立了降血糖活性体外筛选模型,并使用该模型对被分离物质的降血糖活性进行研究。在所分离得到的7种单体物质中,其中6种具有显著的降血糖活性。其中DNJ的α-葡萄糖苷酶的IC50最低,对蔗糖底物和麦芽糖底物分别达到了0.30μg/mL和1.68μg/mL。同时myo-inositol和2-O-α-D-galactopyranosyl-1- deoxynojirimycin也显示出较强的降血糖活性,其IC50与阳性对照拜唐苹相当。通过Lineweaver-Burk法考察了DNJ降血糖活性的抑制类型,结果表明DNJ对蔗糖底物和麦芽糖底物的α-葡萄糖苷酶抑制类型均为混合竞争性抑制。4、本文还研究了26种不同品种桑叶粗提物的降血糖活性随不同季节而变化的规律。结果表明,绝大部分桑叶品种从5月份(采桑季节)到10月份(霜降季节)随季节月份的递增,降血糖活性均有减弱的趋势,最高月份出现在5月份。同时,在26个桑叶品种中,农14,306,402,嘉陵16号,嘉陵20号五种样品表现出较强的降血糖活性。本课题所取得的对桑叶降血糖成分和活性的研究成果对桑叶降血糖作用的深入研究和利用具有较好的理论指导价值。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
第一章 绪论  10-23
  1.1 桑叶  10-11
    1.1.1 桑叶的研究现状  10
    1.1.2 桑叶的药用价值  10-11
  1.2 桑叶有效成分的研究  11-13
    1.2.1 蛋白质和氨基酸  11
    1.2.2 维生素  11
    1.2.3 黄酮  11-12
    1.2.4 生物碱  12
    1.2.5 多糖  12
    1.2.6 甾醇  12-13
  1.3 1-脱氧野尻霉素（DNJ）  13-15
    1.3.1 化学结构及特点  13
    1.3.2 来源与含量  13
    1.3.3 DNJ 的药理作用  13-15
  1.4 DNJ 的提取、分析及纯化方法  15-19
    1.4.1 DNJ 的提取方法  15-16
    1.4.2 DNJ 的分析方法  16-18
    1.4.3 DNJ 的纯化方法  18-19
  1.5 α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型  19-21
    1.5.1 体外筛选模型  19-20
    1.5.2 体内筛选模型  20-21
  1.6 本课题研究的目的及内容  21-23
    1.6.1 研究目的  21-22
    1.6.2 研究内容  22-23
第二章 桑叶样品的预处理及分析方法的建立  23-34
  2.1 实验部分  23-25
    2.1.1 主要原料试剂  23-24
    2.1.2 主要仪器设备  24
    2.1.3 实验方法  24-25
  2.2 结果与讨论  25-32
    2.2.1 桑叶样品的初步分离纯化  25-27
    2.2.2 桑叶中DNJ 及其类似物的HPLC 分析方法的建立  27-31
    2.2.3 精密度和加样回收率的考察  31-32
  2.3 结论  32-34
第三章 DNJ 及其类似物的分离纯化及结构鉴定  34-59
  3.1 实验部分  34-38
    3.1.1 主要原料试剂  34-35
    3.1.2 主要仪器设备  35
    3.1.3 实验方法  35-38
  3.2 结果与讨论  38-57
    3.2.1 物质A 的分离纯化及结构鉴定  38-41
    3.2.2 物质B，物质C，物质D 的分离纯化及结构鉴定  41-50
    3.2.3 物质E，物质F，物质G 的分离纯化及结构鉴定  50-57
  3.3 结论  57-59
第四章 被分离物质的降血糖活性研究  59-70
  4.1 实验部分  59-61
    4.1.1 主要原料试剂  59
    4.1.2 主要仪器设备  59
    4.1.3 实验方法  59-61
  4.2 结果与讨论  61-68
    4.2.1 拜唐苹降血糖活性  61-62
    4.2.2 被分离物质的降血糖活性  62-67
    4.2.3 DNJ 降血糖活性的抑制类型探讨  67-68
  4.3 结论  68-70
第五章 不同桑叶品种粗提物的降血糖活性规律研究  70-76
  5.1 实验部分  70-71
    5.1.1 主要原料试剂  70
    5.1.2 主要仪器设备  70
    5.1.3 实验方法  70-71
  5.2 结果与讨论  71-74
    5.2.1 同一品种不同季节桑叶粗提物的降血糖活性规律  71-72
    5.2.2 同一季节不同品种桑叶粗提物的降血糖活性规律  72-74
  5.3 结论  74-76
第六章 结论、创新点与展望  76-79
  6.1 主要结论  76-78
  6.2 本论文的难点及创新点  78
  6.3 后续研究工作的展望  78-79
参考文献  79-82
附录  82-94
成果清单  94-95
致谢  95

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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