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防风对大小鼠胃肠运动的抑制及机制

作　者: 刘振清
导　师: 魏睦新
学　校: 南京医科大学
专　业: 中医内科学
关键词: 防风小鼠小肠推进率胃排空率大鼠结肠平滑肌收缩细胞 Ca2+ 离子通道中医中药胃肠运动
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:为了初步探讨防风(RS)对胃肠运动的抑制作用,为RS在消化系统疾病临床的应用提供依据,为RS的进一步研究提供实验基础,在整体水平、离体组织水平和细胞水平三个层次,观察了不同浓度RS对小鼠胃肠运动、离体大鼠结肠平滑肌收缩及结肠平滑肌细胞Ca2+移动的影响,并初步探讨其抑制胃肠道平滑肌运动的机制。方法:1.在整体实验中,以生理盐水(NS)作为对照组,采用改进的苯酚红测定法观察不同浓度的RS对正常小鼠小肠推进及胃排空的抑制作用。2.在离体实验中,制备了大鼠结肠平滑肌纵肌肌条并放置在微量多导体外器官水平浴槽中,滴加不同浓度的RS溶液以及其它试剂于浴槽中,记录肌条的等长收缩曲线并加以分析;在细胞实验中,分离并培养大鼠结肠平滑肌细胞,取第二代细胞用于实验,用Fluo- 4/AM充分孵育细胞后,在不同缓冲液存在的条件下,将每一组细胞在处理前都在激光显微镜下测定荧光值,然后分别加入NS以及不同个浓度的RS分别置于37℃孵箱中孵育30分钟,再测定每组细胞的荧光值,分析不同缓冲液条件下处理前荧光值和处理后荧光值的差异以及抑制率的差异,探讨RS对结肠平滑肌细胞Ca2+移动的影响,并初步探讨其机制。结果:1. RS各组均对小鼠小肠推进率和胃排空率有一定程度的抑制作用,其中小肠推进率(SIPR)5 g/kg组(67.59%±3.74%)、10 g/kg组(64.24%±1.45%)、15 g/kg组(60.04%±3.23%)与NS组(77.41%±3.09%)比较差异均有统计学意义(P < 0.05),而20 g/kg组(70.63%±03.72%)、25 g/kg组(72.65%±2.56%)与NS组比较差异无统计学意;胃残留率(GRR)5 g/kg组(40.46%±6.17%)、10 g/kg组(35.86%±6.08%)、25 g/kg组(37.75%±7.42%)与NS组(18.31%±3.94%)比较差异均有统计学意义(P< 0.05),而15 g/kg组(30.02%±5.80%)、20 g/kg组(32.99%±5.82%)与NS组比较差异无统计学意义。2.以NS组离体大鼠结肠平滑肌收缩曲线的峰高和面积为100%,RS各组均对离体大鼠结肠平滑肌收缩有一定程度的抑制作用,和NS组相比较,RS 0.2 g/L组(峰高= 84.72%±5.23%,面积= 75.42%±8.57%),2 g/L组(峰高= 68.85%±8.52%,面积= 63.37%±13.1%)以及20 g/L组(峰高= 63.08%±9.39%,面积= 59.47%±10.02%)在峰高和面积两方面都有统计学意义(P < 0.01),而0.02 g/L组(峰高= 95.74%±3.8%,面积= 94.19%±6.43%)与NS组之间的差异没有统计学意义;先加入RS充分孵育后再加入Ach(1×10-5 mol/L),RS可以抑制Ach引起的离体大鼠结肠平滑肌收缩,在峰高方面,RS 2 g/L组(峰高= 87.72%±4.31%)以及RS 20 g/L组(峰高= 73.74%±2.92%)和对照组之间都有显著差异(P < 0.01),但RS 0.02 g/L组(峰高= 104.05%±5.65%)、RS 0.2 g/L组(峰高= 96.73%±4.96%)和对照组之间的差异没有统计学意义,在面积方面,RS 0.02 g/L组(面积= 80.95%±4.50%)以及RS 0.2 g/L组(面积= 56.99%±10.19%)和对照组相比都有显著差异(P < 0.05),RS 2 g/L组(面积= 39.51%±9.56%)、RS 20g/L组(面积= 30.40%±6.52%)与对照组之间的差异有显著统计学意义(P < 0.01);先用工具药充分孵育后再加入RS(20 g/L),纳络酮+RS组(峰高= 60.57±8.85%,面积= 59.48±9.01%)和心得安+RS组(峰高= 62.3%±8.97%,面积= 60.65%±12.12%)与NS组相比较都有显著差异(P < 0.01),但和NS+RS组(峰高= 60.73%±7.56%,面积= 60.38%±11.1%)之间的差异没有统计学意义,酚妥拉明+RS组(峰高= 99.21±2.58,面积= 100.17±3.6)和NS+RS组之间的差异有显著统计学意义(P < 0.01),但和NS组相比较其差异没有统计学意义;在HB缓冲液中,NS组和RS 0.02 g/L组的处理后荧光值与处理前荧光值相比较其差异没有统计学意义,而RS 0.2,2,20 g/L组的处理后荧光值与处理前荧光值相比较其差异有显著统计学意义(P < 0.05);但在EHB缓冲液中,所有NS组和RS 0.02,0.2,2,20 g/L组的处理后荧光值与处理前荧光值相比较其差异都没有统计学意义;在HB缓冲液中,RS 0.02 g/L组(0.954%±2.35%),0.2 g/L组(4.998%±2.68%)的抑制率与NS组(-0.424%±2.23%)相比较其差异没有统计学意义,而RS 2 g/L组(19.19%±6.3%),20 g/L组(25.42%±5.95%)的抑制率与NS组相比较其差异有显著统计学意义(P < 0.05),但在EHB缓冲液中,所有RS 0.02 g/L组(0.634%±9.07%),0.2 g/L组(-0.028%±5.98%),2 g/L组(0.314%±5.98%),20 g/L组(0.156%±6.1%)的抑制率与NS组(-0.418%±6.96%)相比较其差异都没有统计学意义。结论1. RS有抑制小鼠小肠推进及胃排空的作用。2.防风有抑制离体大鼠结肠平滑肌收缩的作用,其作用机制与肾上腺素能α受体关系密切,与M胆碱受体被阻断可能有关,与阿片受体和β-受体介导无关;RS可引起的细胞内游离钙离子浓度降低,其机制与抑制了细胞外钙离子内流有关,与抑制细胞内钙离子释放无明显关系。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
引言  10-12
第一部分中药防风抑制小鼠胃肠运动的实验观察材料与方法  12-17
  材料与方法  12-14
  结果  14-16
  讨论  16-17
第二部分防风对大鼠结肠平滑肌的作用及其机制材料与方法  17-35
  材料与方法  17-22
  结果  22-27
  讨论  27-35
小结  35-36
参考文献  36-40
综述  40-49
  参考文献  46-49
附录  49-50
致谢  50

防风对大小鼠胃肠运动的抑制及机制

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