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苹果多酚对UVB诱导HepG₂细胞损伤的防护与修复研究

作　者: 崔砾砾
导　师: 王振宇
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 生物化工
关键词: 苹果多酚细胞损伤防护与修复
分类号: S661.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

UVB是波长在280-320nm的中波紫外线。随着臭氧层的日益破坏,到达地面的紫外线越来越多,UVB对人体造成的伤害也越来越大。UVB辐射可诱导机体产生活性氧自由基,从而引起细胞生物学改变,导致基因突变、致癌和细胞死亡。苹果是我国重要的食用水果之一,它含有大量的活性成分—苹果多酚（Apple polyphenols）。由于苹果具有抗氧化、清除自由基的功能所以备受学术界重视,本文在前人工作的基础上开展了对苹果多酚的提取、分离纯化、细胞损伤的防护与修复试验等方面的研究,以期对苹果多酚抗辐射特性进行全面的了解,为其开发利用提供理论依据。本试验以国光苹果为实验原料,应用响应面法对苹果多酚组合溶剂提取条件进行优化,确定出最佳的提取工艺参数。得到苹果多酚最佳提取条件为:提取时间60.04min、提取温度40.03℃、料液比为1:6.02 （mL/g）、70%乙醇与丙酮体积比为1:1.18。苹果经组合溶剂提取、静止沉淀得到苹果多酚粗品后,再经硅胶梯度洗脱分离纯化得到苹果多酚纯品,计算出苹果多酚得率为45.42%,纯度为62.5%。体外抗UVB细胞试验中,以HepG₂细胞为靶细胞,选用MTT比色为检测指标,得到苹果多酚对HepG₂细胞的半数抑制剂量IC50值为286.54μg/ml,进而研究了UVB照射剂量与细胞增殖的关系,发现低剂量UVB促进细胞增殖,高剂量UVB导致细胞死亡,并找到了UVB对细胞损伤的半致死剂量为111s。通过防护与修复试验研究发现,浓度为100μg/ml的苹果多酚对UVB辐射损伤有较强的防护作用,同时,浓度为150μg/ml的苹果多酚对UVB辐射损伤的修复能力最强。再应用DNA-Ladder法检测苹果多酚对细胞DNA损伤的防护与修复情况,琼脂糖凝胶电泳显示出典型的DNA梯状条带。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第1章绪论  8-18
  1.1 课题背景  8-9
  1.2 国内外研究现状及分析  9-16
    1.2.1 植物多酚产品研究现状  9
    1.2.2 苹果多酚及其性质  9-11
    1.2.3 苹果多酚的提取纯化研究现状  11-12
    1.2.4 苹果多酚的生理功能  12-14
    1.2.5 紫外线诱导细胞损伤的研究现状  14-16
  1.3 本课题研究目的及意义  16
    1.3.1 研究目的  16
    1.3.2 研究意义  16
  1.4 本课题主要研究内容  16-18
第2章实验材料与方法  18-29
  2.1 实验材料  18-19
    2.1.1 实验原料  18
    2.1.2 实验试剂  18-19
    2.1.3 实验仪器与设备  19
  2.2 实验方法  19-29
    2.2.1 主要试剂的配制  19-21
    2.2.2 测定原理与方法  21-23
    2.2.3 苹果多酚提取工艺研究  23-24
    2.2.4 静置沉降离心法除杂  24-25
    2.2.5 TLC薄层预试选择展开剂  25
    2.2.6 硅胶柱层析纯化苹果多酚  25-26
    2.2.7 HepG_2细胞培养  26-27
    2.2.8 HepG_2细胞生长曲线的绘制  27
    2.2.9 UVB辐射细胞模型的建立  27
    2.2.10 苹果多酚对HepG_2细胞增殖的影响  27
    2.2.11 苹果多酚对HepG_2细胞UVB辐射损伤的防护作用  27-28
    2.2.12 苹果多酚对HepG_2细胞UVB辐射损伤的修复作用  28
    2.2.13 DNA-Ladder法检测苹果多酚对UVB致HepG_2细胞DNA损伤的防护作用  28
    2.2.14 DNA-Ladder法检测苹果多酚对UVB致HepG_2细胞DNA损伤的修复作用  28-29
第3章苹果多酚的分离纯化研究  29-44
  3.1 苹果多酚标准曲线  29-30
  3.2 提取溶剂的确定  30-31
  3.3 苹果多酚提取单因素条件确定  31-33
  3.4 苹果多酚提取条件响应面法优化  33-38
  3.5 苯酚硫酸法测定国光苹果中总糖含量  38-39
  3.6 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量  39-40
  3.7 静置沉淀除杂  40
  3.8 TLC薄层预试选择展开剂  40-41
  3.9 硅胶柱层析纯化苹果多酚  41-43
  3.10 本章小结  43-44
第4章苹果多酚对UVB引起HepG_2细胞损伤的防护与修复作用  44-57
  4.1 HepG_2细胞生长曲线的绘制  44-45
  4.2 UVB辐射细胞模型的建立  45-47
  4.3 苹果多酚对HepG_2细胞增殖的影响  47-48
  4.4 苹果多酚对HepG_2细胞抗UVB辐射的防护作用  48-50
  4.5 苹果多酚对UVB辐射损伤HepG_2细胞的修复作用  50-51
  4.6 HepG_2 细胞形态学变化  51-54
    4.6.1 HepG_2细胞形态  51-53
    4.6.2 UVB辐射模型  53-54
  4.7 DNA-Ladder法检测苹果多酚对UVB致HepG_2细胞DNA损伤的防护作用  54-55
  4.8 DNA-Ladder法检测苹果多酚对UVB致HepG_2细胞DNA损伤的修复作用  55-56
  4.9 本章小结  56-57
结论  57-59
参考文献  59-64
致谢  64

苹果多酚对UVB诱导HepG2细胞损伤的防护与修复研究

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