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RNA干扰GSK-3β基因表达对Nogo-A抑制PC12细胞轴突生长的影响

作　者: 段晓伟
导　师: 赵洪洋
学　校: 华中科技大学
专　业: 神经外科
关键词: Nogo-A GSK-3β RNA干扰 PC12细胞 轴突
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的研究GSK-3β基因沉默对Nogo-A抑制PC12细胞轴突生长的影响。方法构建靶向GSK-3β的短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体,利用脂质体分别转染干扰质粒、空白质粒和阴性对照质粒到PC12细胞,转染24h后应用荧光倒置显微镜观察转染情况并利用逆转录聚合酶链反应检测GSK-3βRNA的抑制效应。加用小鼠神经生长因子诱导PC12分化,促进其轴突生长,72h后调整细胞密度并加用Nogo-A蛋白,48h后应用荧光倒置显微镜观察在Nogo-A蛋白存在的情况下,各组PC12细胞轴突生长的不同变化,使用Image-Pro Plus6.0软件对各组细胞的轴突进行测量并利用SPSS软件进行统计分析。结果(1)成功构建出针对GSK-3β的shRNA真核表达载体pGenesil1.1- GSK-3β;(2)在蓝色激发光下,成功转染的细胞与未转染的细胞相比,可发出绿色荧光。实验组、空白组和阴性对照组的转染效率分别为43%、80%、76%(3)干扰质粒可以有效地抑制GSK-3β的基因表达;(4)小鼠神经生长因子诱导各组细胞72h及Nogo-A蛋白作用48h后,空白组和阴性对照组细胞轴突长度无明显差别(P>0.05);实验组细胞轴突较空白组和阴性对照组增长(P<0.05),有统计学意义。结论GSK-3β参与Nogo-A对PC12细胞轴突生长的抑制作用。

全文目录


英语缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
Abstract  7-9
前言  9-10
1. 实验材料  10-12
2. 试验方法  12-15
3. 实验结果  15-19
4. 讨论  19-22
参考文献  22-25
综述  25-36
  参考文献  32-36
致谢  36

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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