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短发夹RNA表达载体对2型单纯疱疹病毒UL54干扰效应的研究
作 者: 樊俊
导 师: 吕延成
学 校: 遵义医学院
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: RNA干扰 短发夹RNA 2型单纯疱疹病毒 UL54基因
分类号: R346
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 1次
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内容摘要
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目的：针对2型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2, HSV-2) UL54基因构建短发夹RNA (small hairpin RNA, shRNA)表达载体,采用脂质体转染法介导表达载体转入人胚胎肾293株(Human Embryonic Kidney cells, HEK293)细胞,在体外细胞水平上观察shRNA表达载体对HSV-2 UL54基因表达的影响,以及对HSV-2在HEK293细胞中复制的影响。方法：针对HSV-2 UL54基因筛选出5条拟干扰位点,构建5个抑制UL54基因的短发夹RNA的真核表达载体,分别命名为shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4 shRNA5,以及不针对任何序列的阴性表达载体shRNA NC。通过脂质体介导表达载体转染HEK293细胞,48小时后再接种HSV-2。采用荧光定量RT-PCR技术检测UL54mRNA的转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度。结果：(1)酶切和测序鉴定重组表达载体shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4、shRNA5、shRNA NC构建成功；(2)荧光定量RT-PCR结果显示,与空白组(未转染重组表达载体),shRNA1、shRNA4、shRNA5均不同程度降低UL54 mRNA的表达水平(P<0.05)。(3)终点滴定法结果显示shRNA1、shRNA4、shRNA5可不同程度降低上清液中的病毒滴度((P<0.05)。结论：成功构建shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4、shRNA5重组表达载体,shRNA1、shRNA4、shRNA5能在体外细胞水平上不同程度的干扰HSV-2 UL54基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制,为进一步利用RNAi技术抗HSV-2的研究提供参考数据。
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全文目录
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英文缩略词表 4-6中文摘要 6-7Abstract 7-8前言 8-11材料 11-13实验方法 13-25结果 25-32讨论 32-35结论 35-36参考文献 36-39综述 39-42致谢 42-43作者简介 43
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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