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靶向Bcl-xl的RNAi对胰腺癌细胞增殖凋亡及对吉西他滨化疗敏感性影响的实验研究

作　者: 郭辛翔
导　师: 张海涛
学　校: 苏州大学
专　业: 普通外科
关键词: 胰腺癌 Bcl-xl RNA干扰吉西他滨化疗敏感性
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的Bcl-xl是Bcl-2家族中具有抑制细胞凋亡作用的蛋白,它在多种肿瘤组织中高表达,并且在胰腺癌组织中也高表达,对肿瘤细胞的增殖凋亡及对放化疗敏感性产生影响。RNA干扰(RNAi)可高效特异地调低目的基因表达,本研究旨在通过RNA干扰技术抑制人胰腺癌PANC1细胞Bcl-xl基因的表达,体外观察其对人胰腺癌细胞增殖凋亡、侵袭能力及对吉西他滨化疗敏感性的影响,初步探讨Bcl-xl基因在胰腺癌发生、发展以及耐药性产生中的作用,为胰腺癌的基因治疗探索新的途径。方法①设计制备针对Bcl-xl基因的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),以阳离子脂质体lipofectamineTM2000为载体转染人胰腺癌细胞株PANC1,应用流式细胞仪检测转染效率,确定最佳转染条件。②采用RT-PCR法测定转染后PANC1细胞Bcl-xl的mRNA表达情况,筛选最有效干扰序列。③Transwell小室法检测转染后PANC1细胞侵袭能力;MTT法检测转染后不同时间段细胞增殖活性变化,绘制生长曲线;AnnexinV-FITC /PI双染法检测转染后PANC1细胞的早期凋亡率。④吉西他滨作用后,MTT法检测各组细胞的增殖活性,流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数。结果①设计制备的siRNA成功转染人胰腺癌PANC1细胞,在24孔板中细胞数约为5×104个/孔、细胞汇合度约70%、siRNA浓度约为60nmol/L时获得较佳的转染效率,转染效率最高达79.6%,继续提高siRNA浓度并不能明显提高转染效率。②转入siRNA的PANC1细胞Bcl-xl的mRNA表达量明显下调,其中以siRNA1组Bcl-xl基因mRNA表达降低最为显著。③Transwell小室实验中,实验组、阴性对照组、空白对照组的相对抑制率分别为45.6%、3.2%、0%,与对照组相比,转染组PANC1细胞在体外的侵袭能力明显减弱;MTT实验中,联合组较转染组和化疗组细胞增殖更加缓慢,生长曲线更为平缓;AnnexinV-FITC /PI双染法检测发现,联合组的早期凋亡率最高,为39.3%,转染组与化疗组的早期凋亡率分别为15.9%和17.8%,联合组与转染组和化疗组相比差异有统计学意义(p<0.05)。结论胰腺癌细胞Bcl-xl呈高表达,RNAi能有效调低PANC1细胞Bcl-xl基因的表达,从而抑制PANC1细胞增殖,减弱了其体外的侵袭能力,使细胞凋亡增加;转染Bcl-xl的siRNA显著增强了吉西他滨对胰腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,可以提高胰腺癌对吉西他滨的化疗敏感性。Bcl-xl可以作为潜在的胰腺癌基因治疗靶点,靶向Bcl-xl的基因沉默可作为克服肿瘤化疗耐药的一种有效方法。

全文目录

中文提要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-11
第一部分 Bcl-xl 基因特异性RNA 干扰序列的设计与筛选  11-24
  一、材料  11-12
  二、方法  12-17
  三、结果  17-19
  四、讨论  19-24
第二部分 Bcl-xl 基因沉默对胰腺癌细胞增殖凋亡及对吉西他滨敏感性的影响  24-33
  一、材料  24
  二、方法  24-27
  三、结果  27-30
  四、讨论  30-33
全文小结  33-34
参考文献  34-39
综述  39-56
  胰腺癌的基因治疗进展  39-44
  胰腺癌中Bcl-xl 的研究进展  44-49
  参考文献  49-56
缩略词表  56-57
攻读硕士期间发表的论文  57-58
致谢  58-59

靶向Bcl-xl的RNAi对胰腺癌细胞增殖凋亡及对吉西他滨化疗敏感性影响的实验研究

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