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干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱移行细胞癌中的表达及对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响

作　者: 万锋
导　师: 朱朝辉
学　校: 华中科技大学
专　业: 泌尿外科
关键词: 膀胱移行细胞癌 RNA干扰 Oct4基因膀胱癌EJ细胞
分类号: R737.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:观察干细胞关键转录因子Oct4在膀胱移行细胞癌中的表达,并探讨Oct4基因沉默对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响,探讨Oct4基因作为膀胱癌基因治疗靶点的可行性和有效性。方法:分别用免疫组化和实时定量RT-PCR检测74例膀胱癌组织和32例癌旁组织及24例正常膀胱组织病理标本中的Oct4表达;并将人膀胱癌EJ细胞,常规分为空白对照组、阴性对照组和实验转染组进行实验。体外化学合成Oct4基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),脂质体Lipofectamine 2000介导转染人膀胱癌细胞株EJ细胞;采用RT-PCR和Western印迹方法分别检测特异性siRNA对Oct4基因在mRNA和蛋白水平上沉默效果;转染后采用MTT法检测siRNA对细胞增殖的作用;AO/EB荧光染色法检测其凋亡情况;用细胞划痕和Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果:免疫组化显示Oct4在膀胱癌组织的表达明显高于癌旁组织和正常膀胱组织,阳性表达率分别为83.78%、21.87%、0%,各组差异有统计学意义(P<0.05),Oct4在膀胱癌不同病理分级中的阳性表达率分别为G1组66.67%、G2组87.50%、G3组100%,在淋巴结转移组和非淋巴结转移组的阳性表达率为92.3%,79.1%,随着病理分级的升高和淋巴结转移的出现,Oct4表达水平逐渐升高,各组间差异有统计学意义(P<0.05),但不同分期的膀胱癌组织中Oct4表达差异无统计学意义(P>0.05);实时定量RT-PCR结果显示Oct4在膀胱癌组织中的表达是癌旁组织的的2.0倍,是正常膀胱组织的3.41倍,各组差异有统计学意义(P<0.05),但不同分期的膀胱癌组织中Oct4表达差异无统计学意义(P>0.05);成功转染Oct4-siRNA的膀胱癌EJ细胞,RT-PCR及Western blot分别显示Oct4mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时细胞凋亡率增加(52.73%比11.7%);RNA干扰组明显抑制EJ细胞迁移力和侵袭力(15.34±1.85比63.07±1.73)。结论:Oct4的表达与膀胱癌的分级和淋巴结转移密切相关但与临床分期无关,Oct4的过高表达可能在膀胱癌的发生发展中起重要作用;Oct4-siRNA可以有效地抑制膀胱癌EJ细胞Oct4基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,Oct4-siRNA有效的调控EJ细胞恶性生物学行为。

全文目录

前言  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-9
材料和方法  9-13
实验结果  13-20
讨论  20-22
结论  22-23
参考文献  23-25
综述  25-41
  参考文献  33-41
致谢  41-42
附录  42

干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱移行细胞癌中的表达及对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响

内容摘要

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