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猪体外成熟卵母细胞孤雌激活及凋亡观察

作　者: 王震
导　师: 郑鸿培；王金勇；曾申明
学　校: 四川农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 猪卵母细胞体外成熟胚胎培养孤雌激活 Ca~E+ 凋亡
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本文主要研究了激活液中Ca²⁺浓度对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响，以筛选出最佳的Ca²⁺浓度；研究了猪体外成熟卵母细胞电激活后的体外培养体系，比较了不同培养方式、不同激活液等对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响；通过形态观察和Hoechst33342染色，初步探明了猪成熟卵母细胞体外凋亡的规律。激活液中Ca²⁺浓度对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活影响的实验中，Ca²⁺浓度在0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mmol／L 5个浓度梯度中，卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数差异不显著（p＞0.05），但0.9 mmol／L时囊胚率最高（13.46±5.95）；Ca²⁺浓度在0.0～8.0mmol／L中，发现0.0～2.0 mmol／L卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数差异不显著（p＞0.05），但1.0 mmol／L时囊胚率最高（13.98±2.63），再进一步提高激活液中Ca²⁺浓度会显著降低囊胚率，但对囊胚细胞数影响不大，激活液Ca²⁺浓度提高到6.5 mmol／L以上，囊胚率已经小于5％。猪体外成熟卵母细胞电激活后的体外培养体系实验中，实验1（激活后卵子随机分3组培养：分别移入NCSU23培养液、G2.2-aa培养液、G2.2培养液中各培养7d）的3个组卵裂率差异不显著（p＞0.05），NCSU23囊胚率（14.37±3.77）显著高于G2.2、G2.2-aa组，且差异极显著（p＜0.01），但它们的囊胚细胞数差异不显著（p＞0.05）。试验2（激活后卵子随机分为4组培养：NCSU23不换液培养7d；NCSU23液培养72h后移入G2.2液培养到7d；G2.2液培养72h后移入G2.2液培养到7d；G2.2液培养72h后移入NCSU23液培养到7d）中，4个组卵裂率差异不显著（p＞0.05），但第3组卵裂率（61.81±3.79）最高，其次是第4组（58.94±1.71），第1组囊胚率（12.50±1.49）显著高于其它组，差异显著（p＜0.05），但它们的囊胚细胞数差异不显著（p＞0.05）。实验3（激活后卵子随机分为5组培养：NCSU23液培养7d；G2.2-aa培养7d；G2.2-aa添加亚牛磺酸和半胱氨酸培养7d；G2.2-aa添加胰岛素培养7d；G2.2-aa添加胰岛素，亚牛磺酸和半胱氨酸培养7d）中，卵裂率在5个组中差异不显著（p＞0.05），第1组囊胚率（12.24±1.63）高于其它4组，与第2组差异极显著（p＜0.05），与第3、4、5组差异显著（p＜0.05），且第3、4、5组显著高于第2组，囊胚细胞数差异不显著（p＞0.05）。猪成熟卵母细胞体外凋亡的观察实验中，在未激活组中，胞质不均匀分裂是主要的趋势，高于坏死和胞质均匀分裂；胞质不均匀分裂在24h出现，在24～96h时间段猪体外成熟卵母细胞孤雌激活及凋亡观察有较大的增幅，最高胞质不均匀分裂率出现在132h;胞质均匀分裂在12h出现，在24一72h时间段有较大的增幅，最高胞质均匀分裂率出现在1 20h，之后略有下降;坏死在12h出现并持续增加，在24一108h增幅较大，18Oh坏死率为28.6%。孤雌激活组中，胞质均匀分裂是主要趋势，但60h后坏死率高于胞质不均匀分裂;胞质均匀分裂在12h出现，在24荀0h时间段有较大的增幅，最高胞质均匀分裂率出现在60h，并出现了5.6%的囊胚发育率:胞质不均匀分裂在24h出现并持续增加，在24一72h时间段有较大的增幅，180h的胞质不均匀分裂率为15.4%;坏死在12h出现，在24一108h增幅较大，1 80h之间的坏死率为39，6%。未激活组胞质不均匀分裂形态明显高于孤雌激活组，%h后差异显著勿<0.05);孤雌激活组胞质均匀分裂形态高于未激活组，60h后，两组差别显著勿<0.05):孤雌激活组坏死形态高于未激活组，96h后两组出现明显差异勿<欣05)。

猪体外成熟卵母细胞孤雌激活及凋亡观察

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