学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒构建及其免疫效力研究

作 者: 张雪花
导 师: 侯继波;陈溥言
学 校: 南京农业大学
专 业: 预防兽医学
关键词: 猪细小病毒 VP2基因 生长抑素 病毒样颗粒 免疫原性
分类号: S852.65
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 36次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


猪细小病毒(Procine parvovirus, PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,给世界养猪业造成巨大的经济损失。VP2是其主要衣壳蛋白,约占衣壳蛋白总量的80%,可诱导保护性中和抗体。VP2蛋白体外表达时可自主装配成完整的病毒样颗粒,同时也是构建多价疫苗的良好载体。生长抑素(somatostatin, SS)是下丘脑释放的14肽激素,具有抑制生长激素的分泌的生理功能。生长抑素免疫动物产生抗体,通过中和SS进而提高生长激素水平促进动物生长。本文以猪细小病毒VP2蛋白为载体,在其N端插入4拷贝生长抑素,用杆状病毒表达系统获得自我装配的病毒样颗粒,试图获得既可预防猪细小病毒病又能促进生长的嵌合疫苗。主要研究内容如下:1重组生长抑素的猪细小病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达及鉴定以PPV NJ-a株为模板扩增VP2基因片段,人工合成4拷贝生长抑素基因,克隆至杆状病毒载体pFast-HT A,获得重组质粒pFast-SS4-VP2。转化DH10Bac感受态细胞,蓝白斑筛选三次后鉴定获取阳性重组Bacmid。Bacmid转染sf-9细胞,出现病变后收毒鉴定,得到rBac-SS4-VP2。SDS-PAGE与Western-blot可见约68kDa的rSS4-VP2条带;rBac-SS4-VP2感染细胞IFA检测产生很强的特异性绿色荧光;感染细胞超薄切片电镜观察到大量特征性病毒样颗粒。2杆状病毒表达SS4-VP2重组蛋白纯化免疫原性初步鉴定4周龄清洁级小鼠80只随机分为9组:SS4-VP2/白油、SS4-VP2/铝胶、SS4-VP2/IMS、SS4-VP2/铝胶+CpG、SS4-VP2/IMS +CpG、rBacmid-SS4-VP2/铝胶+CpG、PPV NJ-a灭活苗组、野生型杆状病毒组和PBS组。重组蛋白的免疫剂量为50μg/只,杆状病毒及猪细小病毒灭活疫苗免疫剂量为5×105TCID50/只,共免疫3次,免疫间隔2周。ELISA试剂盒检测猪细小病毒抗体结果表明,重组蛋白组与PPV NJ-a灭活苗组均产生特异性抗体,SS4-VP2/铝胶组抗体水平最高,SS4-VP2/白油组最低,阴性对照组没检测到特异性抗体;利用PK-15细胞检测PPV特异性中和抗体水平,中和抗体的滴度与ELISA检测效价正相关,SS4-VP2/铝胶组中和抗体效价最高;重组蛋白免疫组均产生较高滴度的抗生长抑素抗体,同时,生长激素水平提高了1倍左右。3猪细小病毒多抗的的制备利用PK-15细胞大量增殖猪细小病毒NJ-a株,通过PEG-NaCl方法浓缩、纯化PPV,获得高纯度PPV抗原。将获得的PPV抗原分别用以弗氏佐剂,不完全弗氏佐剂乳化,3次免疫家兔,每次免疫间隔两周,制备得到兔抗PPV特异性多克隆抗体。Western-blotting,间接免疫荧光均证明该多克隆抗体能与杆状病毒表达的VP2蛋白发生特异性反应。

全文目录


中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
英文缩略词表  11-13
第一篇 文献综述  13-51
  第一章 猪细小病毒研究进展  13-31
    1 猪细小病毒的病原学  13-14
    2 猪细小病毒的基因结构  14-18
    3 PPV转录的调控  18-19
    4 PPV的血凝性  19
    5 猪细小病毒的流行病学及致病机理  19-20
    6 临床症状及病理变化  20-21
    7 猪细小病毒疫苗研究进展  21-26
    参考文献  26-31
  第二章 生长抑素研究进展  31-39
    1 SS结构  31-32
    2 SS作用机制  32
    3 SS影响动物生长的生理功能  32-33
    4 动物生长抑素的调控研究  33-35
    5 生长抑素的应用  35-37
    参考文献  37-39
  第三章 杆状病毒/昆虫细胞表达系统研究进展  39-51
    1 杆状病毒的基本特性  39
    2 杆状病毒的基因组结构  39-40
    3 杆状病毒的感染周期及形态结构  40-41
    4 Bac-to-Bac表达系统  41-43
    5 Bac-to-Bac系统蛋白表达特点  43-45
    6 影响杆状病毒系统表达外源基因产物的因素  45
    7 杆状病毒/昆虫细胞表达系统的应用与前景  45-48
    参考文献  48-51
第二篇 试验研究  51-87
  第四章 展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒的制备及鉴定  51-69
    1 主要材料与试剂  52
    2 方法  52-59
    3 结果  59-65
    4 讨论  65-67
    参考文献  67-69
  第五章 展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒的免疫原性评价  69-79
    1 材料  70
    2 方法  70-72
    3 结果  72-75
    4 讨论  75-78
    参考文献  78-79
  第六章 猪细小病毒特异性多克隆抗体的制备与鉴定  79-87
    1 材料  79-80
    2 方法  80-82
    3 结果  82-83
    4 讨论  83-85
    参考文献  85-87
全文总结  87-89
致谢  89

相似论文

  1. 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
  2. IBDV模拟表位与vp2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达与应用,S852.65
  3. 犬细小病毒2型VP2基因在昆虫细胞中的表达及血清抗体间接ELISA检测方法的建立,S852.65
  4. 猪细小病毒河南流行株的分离、鉴定及部分生物学特性研究,S852.65
  5. 传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2基因在家蚕中的表达及亚单位疫苗的初步研究,S855.3
  6. 鸡传染性法氏囊病毒颗粒疫苗的研制及其免疫效果的研究,S858.31
  7. 猪细小病毒感染对猪外周血淋巴细胞细胞因子转录时相影响的研究,S858.28
  8. 丁香胃灵合剂对慢性萎缩性胃炎大鼠SS、Bax含量的影响,R259
  9. 生长抑素类似物对肠梗阻的疗效观察,R574.2
  10. 密码子优化对乙肝病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫原性的影响,R392
  11. 犬细小病毒环介导等温扩增方法的建立和VP2基因的克隆表达,S852.65
  12. 牛分枝杆菌ESAT-6和MPT83蛋白的表达、纯化及其在ELISA方法中初步应用的研究,S858.23
  13. 嵌合猪圆环病毒的构建及其对仔猪的免疫原性,S858.28
  14. 布鲁氏菌omp31、omp2b基因重组山羊痘病毒的构建及免疫原性初步研究,S858.23
  15. 转融合基因K88ac-STⅡ-LTA2/LTB苜蓿的获得及其外源K88ac蛋白的检测与分析,S541.9
  16. 加热对尖吻蝮蛇蛇毒及其组分免疫原性及生物毒性的影响,R96
  17. ~(99)Tc~m-DOTA-NOC的制备及其对乳腺癌荷瘤鼠显像与生长抑素受体表达水平的相关性研究,R737.9
  18. 生长抑素受体亚型特异性激动剂、尼美舒利对人肝癌细胞生长的影响,R735.7
  19. 奥曲肽对胃癌细胞Akt及ZAC的效应,R735.2
  20. 高迁移率蛋白-1在重症急性胰腺炎中的意义以及生长激素联合生长抑素的保护作用,R576

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医基础科学 > 家畜微生物学(兽医病原微生物学) > 家畜病毒学
© 2012 www.xueweilunwen.com