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微波固相合成葡—半乳低聚糖及其抗氧化和免疫活性研究

作　者: 王海松
导　师: 施用晖
学　校: 江南大学
专　业: 水产品加工与贮藏工程
关键词: 葡-半乳低聚糖微波小鼠自由基血脂抗氧化免疫
分类号: TS201.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

葡-半乳低聚糖具有促进肠道内双歧杆菌、乳酸菌增殖,改善矿物质的吸收,降低血脂、胆固醇等功能,这些功能与清除自由基、增强机体抗氧化有关。在低聚糖的合成方法中微波固相合成技术,具有反应速度快、合成产率高、合成过程清洁无污染等优点。因此,本文以乳糖为原料,采用微波固相合成法合成葡-半乳低聚糖,并对其功能性进行研究。首先对微波固相合成葡-半乳低聚糖的反应条件进行优化,经过单因素实验和正交实验最终得出合成低聚糖的最适反应条件为:微波功率1000W,微波处理时间3min,引发剂水的添加量20%,催化剂添加量为3.5%,乳糖转化率为82.71%。产物低聚糖经薄层色谱及高效液相色谱(80℃糖柱)分析,得出产物主要组成依次为:半乳糖占1.2%,葡萄糖占2.70%,乳糖占22.38%,三糖占6.99%,四糖占5.06%,五糖及其以上占61.67%。其次研究了葡-半乳低聚糖体外清除自由基活性,结果表明,高、中、低三种聚合度的葡-半乳低聚糖均可有效清除DPPH自由基和羟自由基(·OH)。其中高聚合度葡-半乳低聚糖对DPPH自由基的清除能力较中、低聚合度葡-半乳低聚糖强,IC50为13 mg/mL;而对羟自由基(·OH)的清除能力,中聚合度葡-半乳低聚糖较强,其IC50为21 mg/mL。动物实验研究实验表明,葡-半乳低聚糖能够显著降低高脂小鼠血浆、肝脏、胰腺、胃、十二指肠、空肠、回肠的自由基水平(p<0.05);显著增强超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性(p<0.05),显著提高小鼠总抗氧化能力(T-AOC)(p<0.05),显著降低脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平(p<0.05)。饲喂葡-半乳低聚糖能够显著降低高脂小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量(p<0.05),显著提高血清高密度脂蛋白(HDL)含量(p<0.05)。免疫实验研究表明,饲喂葡-半乳低聚糖的高脂小鼠脾脏指数显著增加(p<0.05);在ConA刺激下脾脏淋巴细胞转化率显著提高(p<0.05)。高剂量葡-半乳低聚糖能够显著增强高脂小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力(p<0.05)。本法合成的葡-半乳低聚糖可有效降低高脂饲喂小鼠体内自由基含量,调整血脂水平、增强体内抗氧化酶活性,提高小鼠的细胞免疫能力。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
第一章绪论  7-15
  1.1 低聚糖概述  7-12
    1.1.1 低聚糖的含义和种类  7
    1.1.2 常见低聚糖  7
    1.1.3 低聚糖的功能及其应用  7-10
    1.1.4 低聚糖的生产方法概述  10-12
  1.2 低聚半乳糖的研究现状  12-13
    1.2.1 低聚半乳糖简介  12
    1.2.2 低聚半乳糖的结构  12-13
    1.2.3 以乳糖为原料低聚半乳糖的生产  13
  1.3 立题意义  13-14
  1.4 研究内容  14-15
第二章微波固相合成葡-半乳低聚糖的工艺研究及产物分析  15-26
  2.1 引言  15
  2.2 实验材料  15-16
    2.2.1 主要试剂  15
    2.2.2 实验仪器  15-16
  2.3 试验方法  16-18
    2.3.1 主要合成路线  16
    2.3.2 检测指标及方法  16-17
    2.3.3 葡-半乳低聚糖合成条件的单因素实验  17
    2.3.4 葡-半乳低聚糖合成条件的正交实验  17
    2.3.5 反应温度对缩合反应的影响  17-18
    2.3.6 低聚糖产物的薄层层析（TLC）分析方法  18
    2.3.7 低聚糖产物的高效液相色谱（HPLC）分析方法  18
  2.4 结果与分析  18-24
    2.4.1 缩合反应条件的选择  18-20
    2.4.2 正交实验优化反应条件  20-22
    2.4.3 反应温度对缩合反应的影响  22-23
    2.4.4 低聚糖产物的薄层色谱（TLC）分析  23
    2.4.5 低聚糖产物的高效液相色谱（HPLC）分析  23-24
    2.4.6 微波合成产物总糖含量测定  24
  2.5 讨论  24-25
  2.6 本章小结  25-26
第三章葡-半乳低聚糖体外抗氧化活性研究  26-34
  3.1 引言  26
  3.2 材料与方法  26-27
    3.2.1 主要试剂  26
    3.2.2 实验仪器  26
    3.2.3 实验方法  26-27
  3.3 结果与分析  27-31
    3.3.1 不同聚合度产物低聚糖高效液相色谱分析  27-28
    3.3.2 葡-半乳低聚糖清除DPPH 自由基的紫外扫描分析  28-29
    3.3.3 葡-半乳低聚糖与乳糖对DPPH 自由基的清除效果  29
    3.3.4 葡-半乳低聚糖对DPPH 自由基的清除效果  29-30
    3.3.5 聚合度对葡-半乳低聚糖清除DPPH 自由基能力影响  30-31
    3.3.6 聚合度对葡-半乳低聚糖抑制（·OH）自由基能力影响  31
  3.4 讨论  31-32
  3.5 本章小结  32-34
第四章葡-半乳低聚糖对小鼠抗氧化能力及免疫功能的影响  34-47
  4.1 引言  34
  4.2 实验材料  34-35
    4.2.1 主要试剂  34-35
    4.2.2 实验仪器  35
  4.3 试验方法  35-38
    4.3.1 实验动物与实验日粮  35
    4.3.2 动物饲养及处理  35-36
    4.3.3 血液指标的测定  36
    4.3.4 自由基含量测定  36
    4.3.5 抗氧化指标的测定  36-37
    4.3.6 免疫指标测定  37
    4.3.7 数据处理  37-38
  4.4 结果与分析  38-44
    4.4.1 高脂模型的建造  38
    4.4.2 低聚糖对小鼠血脂的影响  38-39
    4.4.3 低聚糖对小鼠肝脏自由基、总抗氧化能力、MDA 含量及抗氧化酶活力的影响  39-40
    4.4.4 低聚糖对小鼠胰腺自由基、总抗氧化能力、SOD 及MDA 的影响  40
    4.4.5 低聚糖对小鼠胃自由基、总抗氧化能力、MDA 含量及抗氧化酶活力的影响  40-41
    4.4.6 低聚糖对小鼠十二指肠自由基、总抗氧化能力抗氧化酶活力的影响  41
    4.4.7 低聚糖对小鼠空肠自由基、总抗氧化能力抗氧化酶活力的影响  41-42
    4.4.8 低聚糖对小鼠回肠自由基、总抗氧化能力、MDA 以及抗氧化酶活力影响  42
    4.4.9 低聚糖对小鼠血清自由基、总抗氧化能力、MDA 及抗氧化酶活力的影响  42-43
    4.4.10 低聚糖对小鼠脏器指数的影响  43
    4.4.11 脾脏淋巴细胞转化率  43
    4.4.12 腹腔巨噬细胞吞噬能力  43-44
  4.5 讨论  44-46
  4.6 本章小结  46-47
总结与展望  47-48
  总结  47
  展望  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-55
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文  55

微波固相合成葡—半乳低聚糖及其抗氧化和免疫活性研究

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