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外生菌根真菌产漆酶能力和耐苯酚胁迫的研究

作　者: 李翠
导　师: 唐明
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 微生物学
关键词: 外生菌根真菌 愈创木酚 漆酶 苯酚 纯培养
分类号: TQ925.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本研究采用愈创木酚筛选法从13种外生菌根真菌中筛选具有产漆酶能力的菌种,研究最佳产漆酶菌种的产酶条件和酶的特性、以及该菌漆酶对苯酚的氧化作用;同时研究苯酚胁迫下,接种最佳产漆酶菌种灰鹅膏菌(Amanita vaginata)对油松(Pinus tabulaeformis)苗木生理生化特性的影响。得出以下结论:1.产漆酶菌株的筛选采用愈创木酚筛选法筛选出灰鹅膏菌(Amanita vaginata)、乳黄粘盖牛肝菌(Suillus lactifluus)、黄地勺菌(Spathularia flavida)、褐黄牛肝菌(Boletus luridus)、灰环粘盖牛肝菌(Suillus laricinus)、美丽褶孔牛肝菌(Phylloporus bellus)、粘盖牛肝菌(Suillus bovinus)和天台山5#(未鉴定菌株)8种外生菌根真菌具有产漆酶能力;漆酶点试试验和漆酶活性大小测定结果表明以灰鹅膏菌产漆酶能力最佳,培养11 d时其酶活性为13.25 U/L。2.培养条件对灰鹅膏菌产漆酶的影响灰鹅膏菌产酶培养条件测定表明,温度为25℃时漆酶活性最高,培养13 d时高达17.94 U/L;在PDA液体培养基中酶活性最高,培养11 d时为12.90 U/L;以葡萄糖为C源、蛋白胨为N源、C/N为4/1、初始pH为6.0时,酶活性和菌丝体干重最高;添加0.5 mmoL/L Cu2+和5 mmoL/L Mg2+时,可增强酶活性。3.灰鹅膏菌漆酶的温度和pH酶学特性灰鹅膏菌漆酶特性研究表明,该酶最适反应温度为25℃、pH为3.0,具有较高的热稳定性,65℃保温60 min剩余酶活为58%;该酶在酸性条件下表现出较强的稳定性,在pH2.0、3.0、4.0保持120 min后,仍保留有75%以上的酶活性;pH5.0和6.0时漆酶活性随着时间的延长下降较快;pH7.0时保持15 min剩余酶活仅为8.5%。4.灰鹅膏菌及其漆酶对苯酚的氧化作用在纯培养条件下,研究了灰鹅膏菌对苯酚的耐受性和苯酚胁迫下漆酶活性,测定了灰鹅膏菌及其漆酶对苯酚的氧化率,结果表明:不同浓度苯酚对灰鹅膏菌生长和漆酶有一定的抑制作用,且随着苯酚浓度的增大抑制作用增强,灰鹅膏菌和其分泌的漆酶对苯酚的氧化率均随着时间的延长而增大,且随着苯酚浓度的升高呈现下降趋势。5.苯酚胁迫下接种灰鹅膏菌对油松生理生化的影响苯酚胁迫下,接种灰鹅膏菌增加了油松苗木的株高、地径、干重和根系活力,苯酚浓度为0 mg/kg时接种幼苗株高比对照时提高8.5%、苯酚浓度为200 mg/kg时地径提高7.78%、苯酚浓度为300 mg/kg时干重增加20.29%,苯酚浓度为400 mg/kg时根系活力增加95.02%;接种外生菌根真菌后,油松叶绿素含量、根部游离脯氨酸含量、SOD、POD和PPO活性均高于非菌根化油松幼苗,在苯酚浓度为400 mg/kg时接种油松叶绿素总含量比对照提高21.67%、POD活性提高114.37%,苯酚浓度为0 mg/kg时游离脯氨酸含量接种比对照提高191.22%、SOD活性提高90.4%,在苯酚浓度为100 mg/kg时接种灰鹅膏菌油松根部PPO活性比对照提高45.42%。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
第一章 文献综述  12-20
  1.1 外生菌根对植物的影响  12-14
    1.1.1 外生菌根促进植物生长  12-13
    1.1.2 外生菌根提高植物抗逆性  13-14
  1.2 漆酶应用及研究现状  14-17
  1.3 苯酚污染及苯酚生物降解  17-18
  1.4 前言  18-20
第二章 外生菌根真菌漆酶高产菌株的筛选  20-26
  2.1 试验材料  21
    2.1.1 菌种  21
    2.1.2 主要仪器与试剂  21
    2.1.3 培养基  21
  2.2 试验方法  21-22
    2.2.1 产酶漆酶菌种的筛选  21
    2.2.2 漆酶点试试验  21-22
    2.2.3 漆酶活性的测定  22
    2.2.4 愈创木酚对ECMF 生长的影响  22
  2.3 结果与分析  22-25
    2.3.1 产漆酶菌种的筛选  22
    2.3.2 漆酶活性强弱的测定（漆酶点试试验）  22-23
    2.3.3 漆酶活性大小的测定  23-24
    2.3.4 愈创木酚对ECMF 生长的影响  24-25
  2.4 小结与讨论  25-26
第三章 培养条件对灰鹅膏菌产漆酶的影响  26-33
  3.1 材料  26
    3.1.1 供试菌种  26
    3.1.2 培养基  26
  3.2 试验方法  26-27
    3.2.1 不同培养基对AV 产漆酶的影响  26-27
    3.2.2 温度对AV 产漆酶的影响  27
    3.2.3 C 源对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  27
    3.2.4 N 源对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  27
    3.2.5 C/N 源对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  27
    3.2.6 pH 对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  27
    3.2.7 金属离子对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  27
  3.3 结果与分析  27-31
    3.3.1 不同培养基对AV 产漆酶的影响  27-28
    3.3.2 温度对AV 产漆酶的影响  28
    3.3.3 C 源对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  28
    3.3.4 N 源对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  28-29
    3.3.5 C/N 源对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  29-30
    3.3.6 pH 对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  30-31
    3.3.7 金属离子对AV 产漆酶和菌丝体生长的影响  31
  3.4 讨论  31-33
第四章 灰鹅膏菌漆酶的温度和pH 酶学特性  33-37
  4.1 材料  33
    4.1.1 菌种  33
    4.1.2 培养基  33
  4.2 试验方法  33-34
    4.2.1 温度对AV 漆酶活性的影响  33
    4.2.2 温度对AV 漆酶稳定性的影响  33-34
    4.2.3 不同pH 对AV 漆酶活性的影响  34
    4.2.4 不同pH 对AV 漆酶稳定性的影响  34
  4.3 结果与分析  34-35
    4.3.1 温度对AV 漆酶活性的影响  34
    4.3.2 AV 漆酶的热稳定性  34-35
    4.3.3 pH 对AV 漆酶活性的影响  35
    4.3.4 不同pH 对AV 漆酶稳定性的影响  35
  4.4 讨论  35-37
第五章 灰鹅膏菌及其漆酶对苯酚的氧化作用  37-44
  5.1 材料  37-38
    5.1.1 主要仪器  37
    5.1.2 菌种与漆酶  37
    5.1.3 主要试剂  37-38
    5.1.4 培养基  38
  5.2 方法  38-39
    5.2.1 AV 对苯酚的耐受性  38
    5.2.2 液体培养下AV 对苯酚的氧化作用  38-39
    5.2.3 AV 漆酶粗酶液对苯酚的氧化作用  39
    5.2.4 漆酶活性测定  39
    5.2.5 苯酚的测定  39
  5.3 结果与分析  39-42
    5.3.1 AV 对苯酚的耐受性  39-40
    5.3.2 液体培养下AV 产漆酶及对苯酚的氧化作用  40-41
    5.3.3 漆酶粗酶液对苯酚的氧化作用及苯酚对其活力的影响  41-42
  5.4 讨论  42-44
第六章 苯酚胁迫下灰鹅膏菌对油松生理生化的影响  44-53
  6.1 材料和方法  45-47
    6.1.1 材料  45
    6.1.2 试验方法  45-46
    6.1.3 菌根侵染和苗木生长状况测定  46
    6.1.4 叶绿素含量和游离脯氨酸含量的测定  46
    6.1.5 根系活力测定  46-47
  6.2 结果与分析  47-51
    6.2.1 苯酚胁迫下AV 对油松生长的影响  47-48
    6.2.2 苯酚胁迫下AV 对油松叶绿素和游离脯氨酸含量的影响  48-49
    6.2.3 苯酚胁迫下AV 对油松根部酶活的影响  49-51
  6.3 讨论  51-53
    6.3.1 菌根侵染率和苗木生长状况测定  51
    6.3.2 苯酚胁迫下AV 对油松叶绿素和游离脯氨酸含量的影响  51-52
    6.3.3 苯酚胁迫下AV 对油松幼苗根部酶活性的影响  52-53
第七章 结论与讨论  53-55
  7.1 主要结论  53
    7.1.1 产酶漆酶菌种的筛选  53
    7.1.2 培养条件对灰鹅膏菌产漆酶的影响  53
    7.1.3 灰鹅膏菌漆酶的温度和pH 酶学特性  53
    7.1.4 灰鹅膏菌及其漆酶对苯酚的氧化作用  53
    7.1.5 苯酚胁迫下灰鹅膏菌对油松生理生化的影响  53
  7.2 创新与特色  53-54
  7.3 研究展望  54-55
参考文献  55-62
致谢  62-63
作者简介  63

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 其他化学工业 > 发酵工业 > 酶制剂（酵素） > 其他
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