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邻苯基苯酚对HepG2细胞的遗传毒性及氧化应激、溶酶体膜完整性机制研究

作　者: 李建庆
导　师: 陈敏
学　校: 大连医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 邻苯基苯酚 DNA损伤氧化应激溶酶体膜稳定性线粒体膜电位
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：邻苯基苯酚(Ortho-phenylphenol, OPP),是防腐保鲜剂的主要有效成分,被广泛应用于水果蔬菜的防霉保鲜,但由于其具有内吸性,可透过果皮进入果肉,造成残留,对人的肝、肾及神经系统都有一定的毒性。多项研究结果表明,OPP具有明显的致癌性和致突变性。Mariko Murata指出OPP对细胞的DNA损伤与活性氧的产生有关。本研究通过观察OPP致HepG2细胞DNA损伤,探讨OPP对DNA损伤可能的毒性机制(氧化性损伤和溶酶体等细胞器损伤),为评估OPP对人类的健康危害提供实验及理论依据。方法：OPP引起体外HepG2细胞DNA损伤：通过单细胞凝胶电泳试验检测细胞DNA损伤,评价OPP的遗传毒性。(1)以2’,7’-二氢二氯荧光素(DCFH)和苯二醛(OPT)分别测定细胞内活性氧(ROS)以及还原性谷胱甘肽(GSH)水平。(2)以吖啶橙(AO)和罗丹明(Rhodamine 123)分别测定细胞内溶酶体膜稳定性和线粒体膜电位的改变水平。(3)通过羟基酪醇(HT)、氯化铵(NH4Cl)、抑胃肽(pepstain A,组织蛋白酶D的抑制剂)和地昔帕明(desipramine,酸性神经磷脂酶的抑制剂)四种干预剂观察氧化性损伤和溶酶体膜稳定性对DNA损伤的影响。实验结果用SPSS v11.5统计软件进行统计分析。结果：OPP(200μM-800μM)作用于HepG2细胞60min后,引起DNA链断裂,细胞成彗星样拖尾,其尾长明显增长,且呈剂量依赖性；同时,细胞内ROS水平增加、GSH水平下降以及线粒体膜电位水平下降。OPP(200μM-800μM)作用于HepG2细胞40min后,可引起细胞内溶酶体膜稳定性改变。用HT、NH4Cl、抑胃肽和地昔帕明四种干预剂处理后,OPP引起的DNA链断裂、细胞内ROS和GSH水平、线粒体膜电位水平以及溶酶体膜稳定性的改变都有明显地减弱,说明上述四种干预剂的保护作用十分显著。结论：OPP能够引起细胞DNA损伤,对HepG2细胞具有遗传毒性。HT在减弱OPP引起的DNA链断裂程度的同时,降低了细胞内ROS水平和GSH消耗量,表明OPP引起的HepG2细胞DNA损伤与氧化应激有关；HT和NH4Cl对OPP引起的溶酶体膜稳定性和线粒体膜电位改变的抑制作用及抑胃肽和地昔帕明对OPP引起的DNA链断裂的保护作用也说明OPP引起的HepG2细胞DNA损伤的可能机制与溶酶体、线粒体有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
前言  8-9
材料和方法  9-12
结果  12-19
讨论  19-22
结论  22-23
参考文献  23-27
综述  27-33
  参考文献  31-33
致谢  33-34

邻苯基苯酚对HepG2细胞的遗传毒性及氧化应激、溶酶体膜完整性机制研究

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