学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

茶叶中氰戊菊酯酶联免疫检测方法的研究

作　者: 徐娜
导　师: 王硕
学　校: 天津科技大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 氰戊菊酯多克隆抗体酶联免疫检测方法基质影响交叉反应
分类号: TS272.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 105次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本论文对茶叶中农药氰戊菊酯残留的免疫学检测方法进行了深入系统的研究。研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备出高效价的氰戊菊酯抗体。建立了简便、快捷、实用的氰戊菊酯免疫学检测方法-直接竞争酶联免疫检测方法。分别对所建立方法的性能指标进行了系统评价,考察了方法检测限、精密度、准确度。通过对氰戊菊酯特异性部分（2-（4-氯苯基）-二甲基丁酸）连接氨基己酸甲酯,进行接臂延长,再将酯化物进行酸化得到半抗原,并将半抗原与大分子蛋白的连接后,对大白兔的免疫得到氰戊菊酯的多克隆抗体。利用得到的抗体,进行直接竞争酶联免疫吸附试验（CD-ELISA）。由于氰戊菊酯在茶叶方面应用较多,故将该方法应用到茶叶样品的快速检测中。由于氰戊菊酯具有特殊旋光性,其标准溶液使用0.5mM的氢氧化钠-甲醇溶液进行配制。通过对试验条件的优化（离子浓度、酸碱度、有机溶剂）,直接竞争酶联免疫检测方法灵敏度(IC₅₀)为9μg kg^-1,检测限(IC₁₅)为0.5μg kg^-1。确立了一种简单、快速、有效的茶叶处理方法,在添加回收试验中,回收率达到76.67-91.43%。通过气相色谱检测方法,对建立的氰戊菊酯直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性,线性相关系数R²值为0.9968。因此,建立的直接竞争酶联免疫检测方法适用于大量茶叶样品的快速检测。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
1 前言  9-25
  1.1 拟除虫菊酯类农药  10-11
  1.2 氰戊菊酯的介绍  11-14
    1.2.1 氰戊菊酯的物理性质  11
    1.2.2 氰戊菊酯的毒性  11-13
    1.2.3 氰戊菊酯在植物中的降解和代谢规律  13
    1.2.4 氰戊菊酯的使用及残留现状  13-14
  1.3 氰戊菊酯的检测方法  14-16
    1.3.1 气相色谱(GC)  14-15
    1.3.2 液相色谱法  15
    1.3.3 免疫分析方法  15-16
  1.4 免疫学检测方法研究  16-23
    1.4.1 免疫学检测的基本原理  16
    1.4.2 免疫学检测的分类  16-19
    1.4.3 酶联免疫方法的建立  19-20
    1.4.4 多克隆抗体简介  20
    1.4.5 单克隆抗体简介  20
    1.4.6 重组抗体简介  20-21
    1.4.7 拟除虫菊酯类农药免疫分析的研究及应用  21-23
  1.5 论文的研究目的及意义  23-25
2 材料与方法  25-36
  2.1 实验材料  25-27
    2.1.1 主要药品和试剂  25-26
    2.1.2 仪器及材料  26
    2.1.3 待测样品  26
    2.1.4 常用溶液的配制  26-27
  2.2 实验方法  27-36
    2.2.1 氰戊菊酯半抗原的合成  27-29
    2.2.2 人工免疫原(FEN-KLH)的制备  29
    2.2.3 活化酯和辣根过氧化物酶连接形成酶标抗原  29
    2.2.4 氰戊菊酯标准溶液的配制  29-30
    2.2.5 抗体的制备  30-32
    2.2.6 直接竞争酶联免疫检测方法的建立  32-33
    2.2.7 氰戊菊酯抗体特异性的测定  33
    2.2.8 样品处理方法  33-34
    2.2.9 氰戊菊酯直接竞争ELISA检测方法性能指标的评价  34
    2.2.10 仪器分析法确证  34-35
    2.2.11 氰戊菊酯直接竞争ELISA稳定性实验  35-36
3 结果与讨论  36-51
  3.1 氰戊菊酯半抗原的合成  36-37
    3.1.1 氰戊菊酯合成方法的选择  36
    3.1.2 半抗原FAA的表征  36-37
  3.2 抗体的制备  37-39
    3.2.1 抗血清效价的测定  37-38
    3.2.2 抗体的纯化以及抗体浓度的确定  38-39
  3.3 直接竞争酶联免疫检测方法的建立  39-42
    3.3.1 酶标抗原浓度优化  39
    3.3.2 直接竞争 ELISA抗体包被浓度优化  39-40
    3.3.3 直接竞争 ELISA标样稀释液离子强度优化  40-41
    3.3.4 直接竞争 ELISA标样稀释液pH优化  41
    3.3.5 氰戊菊酯直接竞争 ELISA标准曲线的绘制  41-42
  3.4 氰戊菊酯抗体特异性的测定  42-43
  3.5 样品基质影响及消除  43-44
  3.6 样品处理方法的确立定及添加回收实验  44-45
    3.6.1 不同提取方法对样品添加回收实验的影响  44
    3.6.2 样品处理方法的确定  44-45
    3.6.3 样品添加回收实验  45
  3.7 样品的检出限  45-46
  3.8 氰戊菊酯直接竞争ELISA检测方法性能指标的评价  46-47
    3.8.1 ELISA方法的检出限  46
    3.8.2 ELISA方法的精密度  46-47
  3.9 气相色谱法检测氰戊菊酯  47-48
    3.9.1 气相色谱检测氰戊菊酯标准曲线的建立  47
    3.9.2 氰戊菊酯直接竞争 ELISA检测结果与仪器分析结果的一致性  47-48
  3.10 氰戊菊酯直接竞争 ELISA稳定性实验  48-51
    3.10.1 抗体稳定性实验  48-49
    3.10.2 酶标抗原稳定性实验  49-51
4 结论  51-52
5 展望  52-53
6 参考文献  53-58
7 攻读硕士学位期间发表论文情况  58-59
8 致谢  59

茶叶中氰戊菊酯酶联免疫检测方法的研究

内容摘要

全文目录

相似论文