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顺铂和阿霉素诱导U2骨肉瘤细胞周期阻滞及凋亡通路的研究

作　者: 詹平
导　师: 戴闽
学　校: 南昌大学
专　业: 外科
关键词: 骨肉瘤化疗细胞周期阻滞凋亡 p53 bcl-2 c-myc
分类号: R738.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:探讨化疗药顺铂和阿霉素损伤人U2骨肉瘤细胞(U2-OS)后p53、bcl-2、c-myc基因表达情况的变化及其诱导细胞周期阻滞及凋亡的情况,为骨肉瘤化疗耐药的解决提供理论依据。方法:分别使用0.3、3.0、30μg/ml顺铂、0.06、0.6、6.0μg/ml阿霉素作用于U2-OS细胞2h后继续培养0、6、12、24、48h,采用噻唑兰比色法(MTT法)检测U2-OS细胞生长抑制率。流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)检测顺铂和阿霉素损伤后继续培养6、24h后细胞细胞周期变化、凋亡率及p53、bcl-2、c-myc基因表达情况。结果:不同浓度顺铂、阿霉素损伤U2-OS细胞后继续培养6h,流式细胞术检测各组G1期细胞分别为67.97%、79.64%、78.09%、80.21%、78.25℅、79.13℅、79.92℅,而p53基因mRNA和蛋白表达和空白对照组比较均增加,bcl-2、c-myc的表达和空白对照组比较无变化,细胞生长抑制率无明显统计学差异;继续培养24h,②、③、④、⑤、⑥、⑦组细胞生长抑制率分别为31.58%、44.12%、59.46%、23.40%、40.31%、57.56%,②、③、④组之间,⑤、⑥、⑦组之间有明显组间差异;流式细胞术检测④、⑦组细胞凋亡率分别为10.04%、14.55%,细胞周期以G2期细胞为主。②、③、④组p53、bcl-2和c-myc mRNA及蛋白表达有组间差异,⑤、⑥、⑦组p53、bcl-2和c-myc mRNA及蛋白表达有组间差异。继续培养48h,各组细胞生长抑制率增高。结论:不同浓度的顺铂和阿霉素短时间(2h)损伤U2-OS细胞仍有细胞增殖抑制作用,这种作用与细胞DNA损伤后p53、bcl-2、c-myc基因表达变化有关;U2-OS细胞DNA损伤后6h即表现出明显的p53基因的表达增强并诱导G1期细胞周期阻滞;继续培养24h,p53、bcl-2、c-myc基因表达变化与药物浓度有关联且诱导G2细胞周期阻滞及凋亡发生。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
第1章引言  8-10
第2章材料和方法  10-23
  2.1 材料  10-13
    2.1.1 细胞株来源  10
    2.1.2 试剂及其配制方法  10-13
    2.1.3 主要仪器  13
  2.2 方法  13-22
    2.2.1 U2-OS 细胞的培养  13-15
    2.2.2 实验分组  15
    2.2.3 顺铂和阿霉素损伤 U2-OS 细胞方法  15
    2.2.4 MTT 法  15-16
    2.2.5 流式细胞仪分析  16
    2.2.6 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测  16-18
    2.2.7 蛋白免疫印迹（Western blot）检测  18-22
  2.3 统计处理  22-23
第3章结果  23-30
  3.1 药物作用后细胞增殖力的改变  23-24
  3.2 流式细胞仪检测细胞周期  24-25
  3.3 p53、bcl-2、c-myc m RNA 的表达  25-28
  3.4 p53、bcl-2、c-myc 蛋白的表达  28-30
第4章讨论  30-33
第5章结论  33-34
致谢  34-35
参考文献  35-38
综述  38-45
攻读学位期间研究成果  45

顺铂和阿霉素诱导U2骨肉瘤细胞周期阻滞及凋亡通路的研究

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