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B群脑膜炎球菌外膜蛋白复合物免疫原性初探

作　者: 时宇
导　师: 王建华
学　校: 北京生物制品研究所
专　业: 病原生物学
关键词: B群脑膜炎球菌外膜蛋白复合物疫苗免疫
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

B群脑膜炎奈瑟氏球菌是引起流行性脑脊髓膜炎的主要病原菌,其血清型别众多,型间缺乏交叉免疫保护。B群脑膜炎球菌疫苗的研发多集中在外膜蛋白(OMPs)及外膜囊(OMV)。自然状态的OMV由完整的外膜组成,包括外膜蛋白(OMP)和脂寡糖(LOS)。这些成分很容易通过去垢剂溶解直接从菌体上获得。脑膜炎奈瑟氏菌体表面的蛋白质,依据分子量可分成5类,其Ⅰ类蛋白是阳离子选择性孔蛋白,能够诱导杀菌抗体的产生;Ⅱ类、Ⅲ类蛋白是阴离子选择性孔蛋白,在一种菌上不能同时表达,抗Ⅱ/Ⅲ类蛋白的抗体只是偶尔具有保护和杀菌活性;Ⅳ类蛋白的功能尚不清楚,可能参与了孔道的形成,抗Ⅳ类蛋白抗体能够抑制特异的抗Ⅰ类及Ⅱ/Ⅲ类蛋白抗体的杀菌活性,从而大大降低细菌的免疫原性,因此Ⅳ类蛋白不应该包含在疫苗成分中,在分离的OMP中尽量减少这种蛋白很重要:V类蛋白在细菌粘附和入侵宿主细胞上起到很大的作用,也是正在被研究的疫苗候选物。本实验挑选了3株具有代表性的菌株,使用去垢剂提取了它们的外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE分析发现:3株菌的OMPs带谱不完全相同,但都含有Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ和V类外膜蛋白。以29356菌株蛋白复合物的不同剂量和针次免疫NIH小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体滴度,结果显示:不同剂量免疫均能诱导小鼠产生IgG抗体,其效价可达1:128000,说明其免疫原性良好。经实验比较选择最佳免疫方案免疫小鼠,然后用3株脑膜炎球菌菌株进行腹腔攻毒,观察主动免疫和交叉免疫保护效果,结果显示:以10个LD50的活菌攻击免疫小鼠后,29356菌株组存活率为100%,51169菌株组存活率是0%,29004菌株组存活率是0%,而阴性对照组存活率为0%,表明以该蛋白复合物免疫小鼠后对同血清型菌的攻毒有很好保护力,但是,对B群的其他菌株缺乏交叉保护。

全文目录

论文部分  3-7
  中文摘要  3-5
  ABSTRACT  5-7
前言  7-11
实验技术路线  11-13
第一部分:B群脑膜炎球菌(29356株)培养及蛋白复合物的提取  13-37
  实验材料  14-17
  实验方法  17-22
  实验结果  22-32
  讨论  32-37
第二部分:OMPs的检定  37-56
  实验材料  38-40
  实验方法  40-47
  实验结果  47-53
  讨论  53-56
第三部分:目的蛋白免疫原性初探  56-83
  实验材料  57-59
  实验方法  59-69
  实验结果  69-81
  讨论  81-83
结论及展望  83-84
参考文献  84-86
附录(综述) B群脑膜炎球菌疫苗研究进展  86-94
参考文献  94-96
致谢  96-97

B群脑膜炎球菌外膜蛋白复合物免疫原性初探

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