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食品中抗草甘膦转基因大豆实时PCR检测方法的建立与应用

作　者: 王小花
导　师: 傅春玲
学　校: 苏州大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 抗草甘膦大豆 PCR SYBR GreenⅠ荧光染料 Taqman探针转基因大豆油
分类号: R151
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 157次
引　用: 2次
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内容摘要

目的:运用PCR技术建立食品中抗草甘膦大豆转基因成分的定性筛选方法和定量检测方法。并通过研究改进大豆油中DNA的提取方法探索建立大豆油转基因成分的定性检测方法。方法:以转基因大豆标准品和苏州各超级市场出售的样品为材料,通过对大豆内源基因lectin、35S启动子基因和目的基因CP4-EPSPS设计引物,进行普通PCR反应,建立加工食品中大豆转基因成分的定性筛选方法;以CP4-EPSPS为靶基因建立了食品中抗草甘膦大豆转基因成分SYBR Green实时PCR定量检测系统,在灵敏度和回收率等方面与Taqman探针实时定量PCR进行比较验证其可行性;对转基因大豆油精炼加工过程的四道重要工艺进行采样,用四种不同的方法提取样品DNA,用Taqman探针PCR检测其中的lectin基因和35S启动子基因,筛选出最佳大豆油DNA提取方法。结果:1.建立的35S定性PCR筛选转基因食品的方法的检出低限为0.5ng,在20个含大豆成分的样品中筛选出2个样品含有转基因成分,其中一种样品被证实含有抗草甘膦大豆。2.建立的食品中抗草甘膦大豆转基因成分SYBR Green实时定量PCR方法检出限为5pg、平均回收率为106%、平均相对偏差为6%,与Taqman探针定量PCR相比灵敏度更高,回收率和相对偏差相似。3.建立的改良CTAB法可以提取的毛油、中和油和脱色油DNA,此基础上建立的转基因大豆油Taqman探针PCR方法可以扩增出这些样品中lectin基因和35S启动子的特异性片段,得出定性检测结果。结论:建立的食品中抗草甘膦大豆转基因成分SYBR Green实时定量PCR方法具有敏感、准确、特异等优点,可用于相关检测中。本实验建立的改良CTAB法提取DNA和Taqman探针PCR检测大豆油转基因成分的方法适合于毛油、中和油和脱色油等样品的检测,为转基因大豆油的监管提供了有效的技术支持。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-7
引言  7-11
第一部分食品中抗草甘膦转基因大豆的定性筛选  11-19
  材料与方法  11-13
  结果与分析  13-17
  讨论  17-19
第二部分食品中抗草甘膦转基因大豆的定量检测  19-32
  材料与方法  19-22
  结果与分析  22-29
  讨论  29-32
第三部分大豆油中转基因成分的定性检测  32-44
  材料与方法  32-36
  结果与分析  36-41
  讨论  41-44
结论  44-45
参考文献  45-50
综述  50-61
攻读硕士学位期间发表的文章  61-62
致谢  62

食品中抗草甘膦转基因大豆实时PCR检测方法的建立与应用

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