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抗草甘膦大豆转基因PCR检测及其饲用安全研究

作　者: 朱元招
导　师: 李德发
学　校: 中国农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 抗草甘膦大豆转基因检测 PCR 饲用安全生长性能
分类号: S816
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本论文研究了RR抗草甘膦转基因大豆、豆粕及其饲料产品中外源基因的PCR检测技术以及系统评价其饲喂动物的安全性。建立大豆及其饲料产品中转基因成分的定性和定量PCR检测方法。以CTAB和GMO试剂盒两种方法提取基因组DNA。用常规定性PCR对外源基因盒结构中的不同基因进行筛选或特异性扩增，对产物进行回收和酶切鉴定，最低检测下限为0.1％；在巢式PCR方法中，对大豆模板DNA的检测下限可达到pg级水平；利用建立的双引物PCR技术同时检测内源和外源基因，检出来自美国、阿根廷的大豆及饲料为转基因阳性产品，取得良好效果。另外，建立了双链DNA SYBR Green Ⅰ结合染料实时荧光定量PCR技术，绘制lec和CaMV35s基因定量扩增标准曲线方程，R~2值分别达到0.9997和0.9992；对已知转基因含量的大豆标准品及大豆模拟样品进行定量，实测值与实际值相对偏差在5～11％范围之间。上述PCR方法适用于RR大豆或饲料中转基因成分的定性与定量检测。通过断奶仔猪生长试验、生长猪消化试验和大鼠亚慢性毒性试验，评价RR抗草甘膦转基因豆粕的饲用价值和安全性。RR大豆(粕)的常规概略养分、氨基酸组成、微量元素、脂肪酸组成及胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子含量在正常范围值内，RR豆粕对断奶仔猪的生产性能和血生理生化无明显影响。生长猪回肠末端安装T型瘘管试验显示，RR转基因豆粕粗蛋白质、氨基酸的回肠表观消化率及回肠真消化率与常规豆粕相近；外源cp4 epsps基因在生长猪肝脏、肌肉、脾脏和胸腺组织中未被检出，在食糜和粪便中的检出率均仅为6.7％。在80只Sprague-Dawley大鼠13wks的亚慢性安全性试验中，饲喂60％常规非转基因或RR转基因豆粕日粮的大鼠生长与采食无显著性差异(P＞0.05)；饲喂90％高含量RR豆粕的大鼠血液学、血清生化和尿液参数在生理值范围内；试验期内无大鼠死亡，大体剖检和组织病理学检验并未发现体组织有病理学变化特征；另外，在大鼠咬肌组织未发现有外源或内源DNA残留。常规与RR抗草甘膦转基因大豆(粕)营养组成具有等价性，对断奶仔猪和生氏猪有相同的营养生物学效价，对大鼠的饲用安全具有实质等同性。

全文目录

第一章绪论  12-33
  1 研究目的和意义  12
  2 国内外研究现状  12-32
  3 研究内容和方法  32-33
第二章试验研究  33-93
  试验一抗草甘膦大豆(粕)导入外源基因PCR定性检测  33-51
    1 前言  33
    2 材料与方法  33-39
    3 结果与讨论  39-50
    4 小结  50-51
  试验二抗草甘膦转基因大豆PCR定量检测研究  51-57
    1 前言  51
    2 材料与方法  51-52
    3 结果与讨论  52-56
    4 小结  56-57
  试验三抗草甘膦豆粕对断奶仔猪的营养学评价  57-67
    1 前言  57
    2 材料与方法  57-60
    3 结果与讨论  60-65
    4 小结  65-67
  试验四抗草甘膦豆粕对生长猪营养价值及外源DNA代谢研究  67-77
    1 前言  67
    2 材料与方法  67-72
    3 结果与讨论  72-76
    4 小结  76-77
  试验五大鼠饲喂抗草甘膦豆粕的亚慢性毒性研究  77-93
    1 前言  77-78
    2 材料与方法  78-82
    3 结果与讨论  82-91
    4 小结  91-93
第三章结论与建议  93-94
●参考文献  94-101
●致谢  101-102
●个人简历  102-103

抗草甘膦大豆转基因PCR检测及其饲用安全研究

内容摘要

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