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牦牛血IgG分离纯化工艺研究

作　者: 金晶
导　师: 张珍
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物食品营养与工程
关键词: 牦牛血免疫球蛋白G 提取工艺分离纯化
分类号: S823.85
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究以新鲜的牦牛血液为原料,采用饱和硫酸铵法,低温无水乙醇沉淀法以及辛酸-硫酸铵法从牦牛血红细胞中提取IgG,通过在不同单因素条件下的提取结果,确定正交试验的参数,对牦牛血IgG提取最佳工艺条件进行了研究,将三种提取IgG方法进行比较,选择出一种提取效率最好的方法,然后采用离子交换和电泳法对牦牛血IgG进行分离纯化并测定。主要研究结果如下:(1)饱和硫酸铵法提取最优工艺参数为BaCl2的添加量是4mL/100mL,饱和(NH4)2SO4溶液百分比浓度为20%,pH值为5.5,温度为30℃,提取的IgG平均含量为24.22mg/mL。(2)低温无水乙醇法提取最优工艺参数为蒸馏水稀释倍数为3倍,乙醇添加量的百分比浓度为25%,pH值为4.5,NaCl溶液的浓度为0.15mol/L,测得IgG平均含量为9.283mg/mL。(3)辛酸-硫酸铵法提取最优工艺参数为饱和(NH4)2SO4溶液百分比浓度为45%,辛酸添加比例为1∶25,pH值为5.5,IgG提取的平均含量为20.64mg/mL。(4)这三种提取方法中饱和硫酸铵法提取效率好,所得IgG含量高,简单快捷,成本低,适合工业化生产;其次为辛酸-硫酸铵法,而低温无水乙醇法相对较差。(5)用离子交换法对IgG蛋白液进行纯化,得到一个洗脱峰,分布在11～26管之间,蛋白液由之前的淡黄色变为白色液体,可见一些杂蛋白已被过滤,继续用PBS缓冲液洗脱,未发现其他组分。经DEAE cellulose-52纯化的IgG蛋白液浓缩后,采用聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)对其蛋白质进行纯度的鉴定,与纯度为≥95%标准IgG的条带相一致且没有其他蛋白出现。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-9
本文常用缩写词  9-10
1 绪论  10-26
  1.1 研究目的及意义  10-11
  1.2 文献综述  11-17
    1.2.1 牦牛加工利用研究进展  11-12
      1.2.1.1 牦牛肉  11-12
      1.2.1.2 牦牛乳  12
      1.2.1.3 牦牛骨  12
      1.2.1.4 毛、绒的利用  12
      1.2.1.5 内脏、血液及下脚料  12
    1.2.2 免疫球蛋白（Ig）研究现状  12-17
      1.2.2.1 Ig 的分布  13-14
      1.2.2.2 Ig 的理化特性及结构  14-15
      1.2.2.3 不同原料Ig 提取研究进展  15-17
  1.3 IgG 的纯化研究进展  17-22
    1.3.1 亲和层析法  18-19
    1.3.2 凝胶过滤  19-20
    1.3.3 离子交换层析法  20-22
  1.4 电泳技术  22-24
    1.4.1 醋酸纤维薄膜电泳  22-23
    1.4.2 琼脂（糖）电泳  23
    1.4.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳  23-24
  1.5 免疫球蛋白在食品上的应用  24-25
  1.6 小结  25-26
2 材料与方法  26-36
  2.1 材料  26
  2.2 方法  26-36
    2.2.1 饱和硫酸铵法提取IgG 试验  26-28
      2.2.1.1 饱和硫酸铵法提取IgG 工艺流程  26
      2.2.1.2 饱和硫酸铵法提取IgG 工艺操作要点  26-27
      2.2.1.3 单因素试验设计  27-28
      2.2.1.4 正交试验设计  28
    2.2.2 低温冷乙醇法提取IgG 的试验  28-30
      2.2.2.1 低温冷乙醇法提取IgG 提取工艺  28-29
      2.2.2.2 低温冷乙醇法提取IgG 提取工艺操作要点  29
      2.2.2.3 单因素试验设计  29-30
      2.2.2.4 正交试验设计  30
    2.2.3 辛酸-硫酸铵法提取IgG 的试验  30-33
      2.2.3.1 辛酸-硫酸铵法提取IgG 提取工艺  30-31
      2.2.3.2 辛酸-硫酸铵法提取IgG 提取工艺操作要点  31-32
      2.2.3.3 单因素试验设计  32
      2.2.3.4 正交试验设计  32-33
    2.2.4 不同提取方法的比较  33
    2.2.5 免疫球蛋白G 含量的测定(沈关心等，1998)  33
    2.2.6 纯化方法  33-34
      2.2.6.1 DEAE cellulose-52 预处理  33
      2.2.6.2 装柱与平衡  33
      2.2.6.3 上样与洗脱  33-34
      2.2.6.4 分部收集  34
    2.2.7 SDS-PAGE 测定蛋白质纯度  34-35
      2.2.7.1 试剂  34
      2.2.7.2 操作步骤  34-35
    2.2.8 试验数据处理  35-36
3 结果分析  36-51
  3.1 饱和硫酸铵法提取IgG 试验结果分析  36-40
    3.1.1 饱和硫酸铵法提取IgG 单因素试验结果分析  36-38
      3.1.1.1 BaCl_2 添加量对IgG 提取的影响  36
      3.1.1.2 (NH_4)_S0_4 百分比浓度对IgG 提取的影响  36-37
      3.1.1.3 不同pH 值对IgG 提取的影响  37
      3.1.1.4 不同反应温度对IgG 提取的影响  37-38
    3.1.2 正交试验结果分析  38-40
  3.2 低温无水乙醇法提取IgG 试验结果分析  40-45
    3.2.1 低温无水乙醇法提取IgG 单因素试验结果分析与讨论  40-43
      3.2.1.1 不同稀释倍数对IgG 提取的影响  40-41
      3.2.1.2 不同乙醇添加量的百分比浓度对IgG 提取的影响  41-42
      3.2.1.3 不同NaCl 溶液的浓度对IgG 提取的影响  42
      3.2.1.4 不同pH 对IgG 提取的影响  42-43
    3.2.2 正交试验结果分析  43-45
  3.3 辛酸-硫酸铵法提取IgG 试验结果分析与讨论  45-48
    3.3.1 辛酸-硫酸铵法提取IgG 单因素试验结果分析与讨论  45-46
      3.3.1.1 不同辛酸添加量对IgG 提取的影响  45
      3.3.1.2 不同饱和(NH4)2504 百分比浓度对IgG 提取的影响  45-46
      3.3.1.3 不同pH 值对IgG 提取的影响  46
    3.3.2 正交试验结果分析  46-48
  3.4 三种提取IgG 方法结果分析与讨论  48-49
  3.5 纯化试验结果  49-51
    3.5.1 离子交换试验结果分析与讨论  49-50
    3.5.2 IgG 的纯度鉴定  50-51
4 讨论  51-54
  4.1 盐析法  51
  4.2 有机溶剂法  51-52
  4.3 辛酸-硫酸铵法  52-53
  4.4 工业化生产  53-54
5 结论  54-55
6 展望  55-56
参考文献  56-62
致谢  62-63
作者简介  63-64
导师简介  64

牦牛血IgG分离纯化工艺研究

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