学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

凉山半细毛羊Mef2A、Mef2C基因克隆与组织时空表达

作　者: 吴忠海
导　师: 吴登俊
学　校: 四川农业大学
专　业: 畜牧生物工程
关键词: 凉山半细毛羊 Mef2A Mef2C 克隆 QRT
分类号: S826.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 37次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

Mef2属于MADS大家族成员,它的结合位点序列广泛存在于肌肉组织特异性表达基因的调控区,在肌肉与神经发育中发挥重要作用。可以激活多种肌肉发生相关基因的表达,这些基因的表达产物对于肌肉组织的分化、维持和再生等有重要作用。Mef2拥有57个氨基酸的MADS-box结构域,具有极强的保守性。与MADS-box临近的29个氨基酸组成Mef2结构域,它主要在提高DNA亲和力、蛋白质二聚化以及为其它辅助因子相互作用提供场所。为了研究凉山半细毛羊 Mef2A与Mef2C基因结构及出生后组织时空表达情况。根据GenBank中牛、人、鼠Mef2A与Mef2C基因序列保守区域设计引物,扩增编码区序列。根据克隆所得基因序列设计引物,利用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析其在凉山半细毛羊的组织时相相对表达量。试验克隆出Mef2A基因部分编码区779bp片段,包含MADS区域与MEF2特征区域。与牛、人、小鼠同源性比对结果分别是98.8%、95.6%、92%。Mef2C基因全编码区长度为1302bp,编码434个氨基酸,与牛、人、小鼠的同源性分别为99.5%、99.8%、93%。结果显示：Mef2A在物种进化中的变异性比较大,而Mef2C相对则比较稳定。同源比对结果显示两者的N端非常保守,变异区域主要出现在Mef2结构域后。Mef2C的C末端保守,变异较大的区域出现在中间部分区域。两个基因的信号肽位置相同,信号肽位置出现在MADS区域内,29至30为切割位点。同时磷酸化位点包含很多的Ser残基。基因的二级结构以无规卷曲为主,其次为α-螺旋,β-折叠最少。Mef2A在90到108有一个双向的跨膜结构,Mef2C在192至211有一个双向跨膜区,还有2个内向外的单向跨膜结构。另外疏水结构分析Mef2A有9、9、2个氨基酸的疏水区域。Mef2C有10、2、12、6、2、2、15、2、11个氨基酸的疏水区域。采用QRT-PCR技术研究了绵羊Mef2A、Mef2C基因在生长期的时空表达。随机选择15d、60d、105d、160d、195d、240d六个时期,每个时期3只凉山半细毛羊,采集大脑、背肌、肝脏、心脏、皮肤5个组织进行研究。研究结果显示Mef2A在大脑、肌肉、肝脏、心脏表达高,皮肤是低表达组织。各个时期的表达高峰非同一组织,每个时期组织间表达差异显著(P<0.05)。Mef2C在大脑、背肌是高表达组织,显著高于心脏、肝脏、皮肤等低表达组织(P<0.05)。各个时期的组织表达都存在显著性差异(P<0.05)。表明Mef2A, Mef2C都为控制肌肉、心脏、大脑、肝脏发育的主要基因之一。Mef2A在凉山半细毛羊出生后组织中表达变异较大,这些表明Mef2A在各时期有表达时序性,是否是各组织相互作用调节需要进一步证实。预测Mef2A在各个生长期对于不同的组织发挥作用,Mef2C基因在出生后有组织表达特异性,肌肉和大脑是主要的表达组织,预测在神经调节和生长发育中有重要作用。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
常用词缩写  8-9
目录  9-12
前言  12
1 文献综述  12-21
  1.1 凉山半细毛羊资源群体  12-15
    1.1.1 生态条件  12-13
    1.1.2 凉山半细毛羊的来源  13-14
    1.1.3 生长发育性状  14
    1.1.4 凉山半细毛羊研究进展  14-15
  1.2 Mef2概述  15-21
    1.2.1 Mef2家族基因结构  15-16
    1.2.2 信号传导通路  16-17
    1.2.3 Mef2结合蛋白  17-18
    1.2.4 Mef2生物学功能研究  18-20
    1.2.5 Mef2调节功能  20-21
    1.2.6 研究目的  21
2 材料与方法  21-31
  2.1 试验材料  21-24
    2.1.1 样品来源  21
    2.1.2 主要仪器与试剂  21-24
  2.2 实验方法  24-31
    2.2.1 克隆引物设计  24
    2.2.2 总RNA的提取  24-25
    2.2.3 总RNA质量检测  25
    2.2.4 反转录PCR  25
    2.2.5 PCR扩增  25-26
    2.2.6 目的基因克隆与测序  26-28
    2.2.7 实时荧光定量PCR  28-31
3 结果分析  31-42
  3.1 凉山半细毛羊基因克隆与序列分析  31-39
    3.1.1 总RNA提取  31
    3.1.2 RT-PCR结果  31-32
    3.1.3 序列测序  32
    3.1.4 碱基组成  32
    3.1.5 氨基酸组成分析  32-34
    3.1.6 氨基酸序列比对  34-36
    3.1.7 信号肽分析  36
    3.1.8 磷酸化位点分析  36
    3.1.9 疏水性分析  36-37
    3.1.10 跨膜区分析  37
    3.1.11 蛋白质二级结构  37-38
    3.1.12 蛋白功能域预测与分析  38-39
  3.2 凉山半细毛羊Mef2A和Mef2C组织时空表达模式  39-42
    3.2.1 Mef2A组织表达差异  39-40
    3.2.2 Mef2C组织表达差异  40-41
    3.2.3 Mef2A时空表达  41
    3.2.4 Mef2C时空表达  41-42
4 讨论  42-45
  4.1 Mef2A和Mef2C序列分析  42-43
    4.1.1 Mef2A和Mef2C翻译后修饰  42-43
    4.1.2 同源性比对  43
  4.2 Mef2A和Mef2C组织时空表达分析  43-45
    4.2.1 QRT-PCR技术  43-44
    4.2.2 Mef2A表达结果  44
    4.2.3 Mef2C表达结果  44-45
5 结论  45-46
参考文献  46-52
附图:克隆测序  52-58
致谢  58

凉山半细毛羊Mef2A、Mef2C基因克隆与组织时空表达

内容摘要

全文目录

相似论文