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微透析技术在植物活体取样中的应用研究

作　者: 李日红
导　师: 张伟东；姜国斌
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 环境科学
关键词: 微透析植物内源激素体外回收率高效液相色谱吴屯杨
分类号: X173
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文将微透析技术引入植物活体取样,对微透析技术在植物活体取样中的应用进行了研究。研究结果如下:1.探讨了植物微透析取样前后探针体外回收率的变化情况。将盆栽吴屯杨作为取样对象,以植物激素为检测物,利用高效液相色谱仪进行测定。在每次微透析取样前、后测定微透析探针的体外回收率,研究结果表明:微透析技术在植物体上取样进行定量测定是可行的;探针在最初使用时回收率相对偏低,接下来回收率会升高并达到最大值,然后逐渐下降;探针在植物活体上取样可重复多次使用,且每次探针的体外回收率都各不相同,因此,在进行定量测定时,每次取样都须进行探针回收率的测定,以此来修正样品中待测物质的测定值。2.研究了微透析探针在测定植物激素时体外回收率的影响因素,结果显示:低的灌流速度下,探针有较高的回收率;灌流速度一定时,探针外激素浓度的变化对探针回收率的影响较小,几乎可以忽略不计;即使是同一型号的探针,不同探针之间回收率仍有显著差异,因此不能用一支探针的回收率去推断另一支的回收率;在一定的取样时间内,探针的回收率没有显著变化,表明本试验所用探针稳定性良好;温度的变化对探针回收率有较大影响,较高的温度有利于提高探针的回收率。3.以鹅掌柴及吴屯杨为材料,采用微透析-高效液相色谱联用的方法提取并测定内源激素样品。在微透析探针插入植株嫩茎后的不同时间段分别收集透析液。HPLC色谱条件:Inertsil ODS-SP色谱柱,V(甲醇):V(水,0.2%磷酸)=60:40为流动相,0.6mL/min的流速,柱温为30℃,检测波长:赤霉素,203nm;细胞分裂素,273nm;生长素,214nm;脱落酸,263nm。透析液样品在确定的色谱条件下直接进样,较好地分离测定出植株嫩茎中及其质外体内赤霉素、细胞分裂素、吲哚乙酸、脱落酸的含量。初步研究了盐胁迫下吴屯杨体内激素含量的变化,结果显示经过盐处理的吴屯杨植株体内脱落酸含量有明显的增加。通过该方法测定植物激素其加标回收率可达90%以上,保留时间精密度在0.013%-0.105%之间,线性相关系数(r)大于0.999,实现了植物内源激素实时、活体、在线的测定。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-11
1 微透析技术研究进展  11-23
  1.1 微透析及其取样优越性  11-12
    1.1.1 微透析原理  11
    1.1.2 微透析技术优越性  11-12
  1.2 微透析探针的回收率及相关问题和方法  12-15
    1.2.1 微透析探针回收率  12
    1.2.2 探针回收率的影响因素  12-14
    1.2.3 微透析探针的校正  14-15
  1.3 微透析与现代分析技术联用  15-17
    1.3.1 高效液相色谱（HPLC）与微透析取样联用  15
    1.3.2 质谱技术(MS)与微透析取样联用  15
    1.3.3 毛细管电泳技术(CE)与微透析取样联用  15-16
    1.3.4 电化学生物传感器与微透析取样联用  16
    1.3.5 荧光分析法与微透析取样联用  16-17
    1.3.6 紫外-可见分光光度法（UV）、原子吸收分光光度法(AAS)与微透析取样联用  17
  1.4 植物微透析取样研究进展  17-23
    1.4.1 微透析技术获取植物质外体汁液  17-18
    1.4.2 微透析技术测定植物内源激素研究进展  18-23
2 植物微透析取样待测物回收率的探讨  23-29
  2.1 材料与方法  24-25
    2.1.1 试验材料  24
    2.1.2 色谱条件及标准溶液的配制  24
    2.1.3 透析液的获取  24
    2.1.4 微透析探针体外回收率的测定  24-25
  2.2 结果与分析  25-27
    2.2.1 透析液的定性分析及测定植物内源激素的标准曲线  25-26
    2.2.2 微透析探针体外回收率测定结果  26-27
  2.3 讨论  27-29
3 植物激素微透析体外回收率测定影响因素研究  29-34
  3.1 仪器与试剂  29
    3.1.1 仪器  29
    3.1.2 试剂  29
  3.2 色谱条件  29
  3.3 线性关系及保留时间精密度  29-30
  3.4 微透析探针体外校正试验  30-33
    3.4.1 灌流速度对探针回收率的影响  30-31
    3.4.2 探针外介质浓度对回收率的影响  31
    3.4.3 微透析取样时间对回收率的影响  31-32
    3.4.4 温度对回收率的影响  32-33
  3.5 讨论  33-34
4 微透析-HPLC 联用测定植物内源激素  34-47
  4.1 材料与方法  34-36
    4.1.1 试验材料  34
    4.1.2 色谱条件  34-35
    4.1.3 激素标准溶液的配制  35
    4.1.4 植物激素透析液样品的获取  35-36
    4.1.5 微透析探针体外回收率的测定  36
  4.2 结果与分析  36-45
    4.2.1 植物激素标准品定性分析  36-37
    4.2.2 峰面积-浓度一元线性回归分析  37-38
    4.2.3 透析液激素样品测定  38-44
    4.2.4 透析液样品加标回收率的测定  44
    4.2.5 透析液样品稳定性的测定  44-45
  4.3 盐胁迫下吴屯杨（Populus-wutunenses）内源激素水平变化初探  45-46
  4.4 讨论  46-47
结论  47-48
参考文献  48-55
附录A 缩略词表  55-56
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  56-57
致谢  57

微透析技术在植物活体取样中的应用研究

内容摘要

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