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Aurora B激酶抑制剂3-羟基黄酮的抗肿瘤作用探讨暨Ly-6基因家族新成员LYPD6的克隆和特征分析

作　者: 张轶凤
导　师: 余龙
学　校: 复旦大学
专　业: 遗传学
关键词: Aurora 基因家族 LYPD6 Ly-6 黄酮羟基抗肿瘤作用激酶抑制剂功能研究 cDNA 转录活性结构域人类睾丸转染文库亚细胞定位活性检测激酶活性肿瘤细胞基因的
分类号: Q343
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本论文由两部分的研究工作组成。第一部分分析了3-羟基黄酮对内源性Aurora B激酶活性的抑制及抗肿瘤作用,第二部分关于人类LYPD6基因的克隆和功能研究。通过这两项研究,我们发现：(1)我们通过高通量筛选,得到了一个新的Aurora B激酶抑制剂——3-羟基黄酮。体外酶活试验证明,3-羟基黄酮抑制Aurora B的IC50在nmol数量级。细胞学实验结果显示,3-羟基黄酮可大幅度降低组蛋白H3的磷酸化,表明其抑制内源Aurora B的活性。BIAcore检测3-羟基黄酮和Aurora B蛋白的相互作用,结果显示两者解离常数达到1.01×10-5mol／L。3-羟基黄酮在5μM浓度下能抑制肿瘤细胞克隆形成率和减低细胞存活率,还表现为给药期肿瘤细胞生长抑制,停药后又恢复了快速生长,证明3-羟基黄酮具有抑制肿瘤细胞快速增殖的作用。(2)从人类睾丸cDNA 文库中克隆了一个新的具有LU结构域的新基因LYPD6, LU蛋白结构域长约为80个氨基酸,具有10个保守的半胱氨酸残基形成特殊的二硫键结构。因此,我们将这个新基因定义为Ly-6 基因家族的新成员,它定位于染色体2q23.1-23.2。LYPD6 cDNA长度为3501bp,包含一个开放阅读框编码171个氨基酸。亚细胞定位显示在COS-7细胞中过表达时,LYPD6定位于细胞质。RT-PCR显示LYPD6广泛存在于人体组织中,但在心、脑中表达量较高。此外,在HEK-293T细胞中过表达LYPD6可以抑制AP1通路的转录活性。以上两部分的研究,分别证明3-羟基黄酮具有抑制肿瘤细胞快速增殖的作用以及在HEK-293T细胞中过表达LYPD6可以抑制AP1通路的转录活性。为今后的进一步深入研究奠定了坚实的基础。

全文目录

缩略词简表  6-7
中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
第一章 3-羟基黄酮对内源性Aurora B激酶活性的抑制及抗肿瘤作用  10-32
  前言  10-11
  材料和方法  11-21
    一.实验材料  11-15
    二.主要仪器设备  15-16
    三.计算机分析软件  16-17
    四.技术路线和实验方法  17-21
  结果  21-28
    一.3-羟基黄酮是一个新的Aurora B激酶抑制剂  21-23
    二.3-羟基黄酮与Aurora B激酶的分子互作检测  23-24
    三.3-羟基黄酮抑制作用和浓度具有量效关系  24-28
  讨论  28-30
  参考文献  30-32
第二章人类LYPD6基因的克隆和功能研究  32-53
  前言  32-34
  材料和方法  34-41
    一.材料  34-35
    二.主要仪器设备  35-36
    三.主要的计算机分析软件  36-37
    四.技术路线和实验方法  37-41
  结果  41-49
    一.人类LYPD6基因的克隆、鉴定  41-42
    二.LYPD6是Ly-6超家族的成员  42-43
    三.人LYPD6基因的染色体定位和基因组序列分析  43-44
    四.LYPD6的组织表达谱  44-45
    五.LYPD6的亚细胞定位  45-47
    六.LYPD6对AP1信号通路的作用  47-49
  讨论  49-50
  参考文献  50-53
小结  53-54
附录1 文献综述 Aurora激酶作为抗癌药物靶点的展望  54-63
  参考文献  61-63
附录2 硕士期间论文发表及获奖情况  63-64
致谢  64-65

Aurora B激酶抑制剂3-羟基黄酮的抗肿瘤作用探讨暨Ly-6基因家族新成员LYPD6的克隆和特征分析

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