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胡子鲶Dmrt1基因全长cDNA的克隆和时空表达

作　者: 王静杰
导　师: 李广丽；朱春华
学　校: 广东海洋大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 胡子鲶性别决定 Dmrt1 DM结构域
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

鱼类的性别是遗传因素及环境因素共同作用的结果。研究鱼类某些基因的表达与性别分化之间的关系,不但可在一定程度上揭示其性别决定形成机制,而且在生产实践中对鱼类性别的人工干预也具有重要的理论指导意义。本文以我国常见淡水养殖鱼类胡子鲶(Clarias fuscus)为研究对象,利用RT-PCR和SMARTer RACE技术克隆获得Dmrt1基因cDNA全长,预测Dmrt1编码的蛋白序列,并利用生物信息学方法分析其结构及功能;利用半定量RT-PCR技术检测胡子鲶性腺(精巢/卵巢)、肌肉、小肠、肝脏、心脏、头肾、鳃丝、脑和眼等十个组织中Dmrt1基因的表达以及Ⅱ~Ⅴ期精巢中的表达。结果表明:胡子鲶Dmrt1基因cDNA全长为1417 bp,其中5’非编码区(5’UTR)为35 bp,3’非编码区(3’UTR)为516 bp,开放阅读框(ORF)包含864 bp,编码287个氨基酸(aa);胡子鲶DMRT1与虹鳟和斑马鱼相似性最高,达到100%,与红鳍多纪河鲀相似性达99%。通过与Genbank上已知氨基酸序列进行蛋白比对发现胡子鲶DMRT1中具有DMRT基因家族共有的特征——DM结构域,此结构域保守性很高,多序列比对结果显示与鱼、爪蟾、鸡、鼠、猪和人等不同物种的DM结构域相似性均在80%以上。此外,胡子鲶的DMRT1的DM结构域具有典型的“C2H2C4”锌指结构,使Dmrt1能够与下游DNA结合,在基因的转录中起到调控作用。胡子鲶Dmrt1基因系精巢特异性表达基因,仅在精巢中表达,而卵巢及其他8种组织中均不表达;胡子鲶Dmrt1基因在第Ⅱ期精巢(即精子发生期)中表达量显著高于第Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期(P<0.05)。综上可知,胡子鲶Dmrt1基因与精巢发育和精子发生有关。

全文目录

摘要 6-7Abstract 7-91 前言 9-19 1.1 鱼类性别决定机制 9-16 1.1.1 鱼类遗传型性别决定 9-14 1.1.2 鱼类环境型性别决定机制 14-16 1.2 鱼类的精巢结构及发育分期 16-17 1.3 研究目的及意义 17-192 胡子鲶 Dmrt1 全长cDNA 的克隆及生物信息学分析 19-39 2.1 材料及方法 19-27 2.1.1 实验动物 19 2.1.2 所用试剂及溶液配制 19-21 2.1.3 胡子鲶Dmrt1 基因克隆 21-26 2.1.4 序列测定及生物信息学分析 26-27 2.2 结果 27-36 2.2.1 胡子鲶Dmrt1 基因全长cDNA 克隆 27-30 2.2.2 生物信息学分析 30-36 2.3 讨论 36-39 2.3.1 胡子鲶DMRT1 蛋白结构功能预测 36-38 2.3.2 胡子鲶Dmrt1 保守性及系统进化分析 38-393 胡子鲶Dmrt1 在成鱼各组织中分布及不同发育时期精巢中的表达 39-46 3.1 材料及方法 39-42 3.1.1 实验动物 39 3.1.2 实验仪器及工具 39 3.1.3 所用试剂及配制 39-40 3.1.4 胡子鲶各组织总RNA 提取 40 3.1.5 特异性片段及内参基因扩增 40-41 3.1.6 凝胶图片及数据分析 41 3.1.7 不同时期精巢组织学切片 41-42 3.2 结果 42-44 3.2.1 胡子鲶不同组织中Dmrt1 基因的表达 42 3.2.2 胡子鲶Dmrt1 基因在精巢发育不同时期的表达 42-44 3.3 讨论 44-46 3.3.1 胡子鲶Dmrt1 不同组织中的表达 44-45 3.3.2 胡子鲶Dmrt1 精巢不同时期表达 45-464 结论 46-47 4.1 胡子鲶Dmrt1 基因全长cDNA 46 4.2 胡子鲶Dmrt1 不同组织中的表达 46 4.3 胡子鲶Dmrt1 精巢不同发育时期的表达 46-47参考文献 47-57致谢 57-58作者简介 58-59导师简介 59

胡子鲶Dmrt1基因全长cDNA的克隆和时空表达

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