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氧化苦参碱对STAT1，3/PIAS1，3在人肾小球系膜细胞增殖中表达的影响

作　者: 党红星
导　师: 金玉
学　校: 兰州大学
专　业: 儿科学
关键词: 人肾小球系膜细胞 增殖 氧化苦参碱 JAK/STAT信号通路 P-STAT1/PIAS1分子，P-STAT3/PIAS3分子
分类号: R692.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:观察脂多糖(LPS)诱导下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖时JAKs/STATs信号转导通路分子和内源性抑制分子P-STAT1/PIAS1,P-STAT3/PIAS3蛋白和mRNA表达情况,及氧化苦参碱对其干预的影响和可能的机制,为进一步开展防治肾小球硬化研究提供实验依据。方法:1.采用改良法体外原代培养HMC,分为空白对照组和LPS模型组及氧化苦参碱干预组。空白对照组不进行有效干预,LPS模型组给予LPS 10ng/L刺激诱导增殖,氧化苦参碱干预组在LPS模型组的基础上加入氧化苦参碱320mg/L,各组分别在培养12、24、48h时以MTT法检测HMC的增殖情况,ELISA检测细胞上清Col-Ⅳ含量。2.收集同时段细胞,提取细胞裂解蛋白和mRNA,采用Western blot检测P-STAT1/PIAS1,P-STAT3/PIAS3的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测STAT1/PIAS1,STAT3/PIAS3的mRNA表达。结果:1.LPS组细胞增殖较对照组显著加快(P＜0.01),Col-Ⅳ的表达显著高于对照组(P＜0.01);氧化苦参碱干预后细胞增殖和Col-Ⅳ的表达显著较模型组降低(P＜0.01);2.P-STAT1/PIAS1蛋白和mRNA表达情况:LPS诱导下各时间段P-STAT1表达升高,表达量高于对照组(P＜0.05),经OM干预后表达显著下降(p＜0.01);LPS诱导下PIAS1表达量显著降低(P＜0.01),经OM干预,与LPS组相比各时间段均上升(P＜0.05)。3.P-STAT3/PIAS3蛋白和mRNA表达情况:LPS诱导下P-STAT3 12h开始表达升高,表达量显著高于对照组(P＜0.01),经氧化苦参碱干预后与LPS模型组相比表达显著下降(p＜0.01);LPS诱导下PIAS3各时间段表达量显著降低(P＜0.01),经氧化苦参碱干预,与LPS模型组相比各时间段均上升(P＜0.05)。结论:LPS诱导的人肾小球系膜细胞增殖过程中P-STAT1/PIAS1蛋白及mRNA表达有显著变化。氧化苦参碱可能通过上调PIAS1和下调STAT1影响JAK/STAT信号转导通路对系膜细胞增殖的调节。LPS诱导的人系膜细胞增殖过程中P-STAT3蛋白及mRNA表达上调,PIAS3表达下调。氧化苦参碱可能通过逆向调节JAK/STAT信号转导通路中STAT3/PIAS3分子的磷酸化表达,从而影响HMC增殖过程。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
正文  9-49
  前言  9-12
  第一部分 改良法人胎肾小球系膜细胞原代培养  12-23
    一 材料与方法  12-17
    二 结果  17-21
    三 讨论  21-22
    四 小结  22-23
  第二部分 STA1/PIAS1，STAT3/PIAS3信号分子在LPS诱导人胎肾小球系膜细胞增殖中的作用及氧化苦参碱对其影响  23-43
    一 材料与方法  24-33
    二 结果  33-40
    三 讨论  40-42
    四 小结  42-43
  附:实验中用到的主要网址和生物软件  43-44
  参考文献  44-49
综述一 JAK/STAT途径和慢性肾小球疾病  49-56
综述二 促肾小球纤维化相关细胞因子及研究进展  56-66
缩略语及英文注释  66-69
附录  69-70
致谢  70

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病 > 肾小管、肾小球疾病
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