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蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926增殖和诱导凋亡的研究

作 者: 李蓉
导 师: 王征;陈小义
学 校: 天津大学
专 业: 药物分析
关键词: 蟾蜍灵 EAhy926细胞 增殖 凋亡 Caspase3 Bcl-2
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


本论文以人血管内皮细胞EAhy926为靶细胞,通过一系列的研究,观察蟾蜍灵作为钠泵抑制剂对血管内皮细胞增殖与死亡的形态学特征;测定了蟾蜍灵对EAhy926细胞周期的影响以及细胞内游离的Ca2+、Na+、K+浓度的变化;通过RT-PCR技术检测了蟾蜍灵作用细胞前后对钠泵α1亚单位、β1亚单位、Caspase3Bcl-2 mRNA表达的影响,为探讨蟾蜍灵在血管内皮细胞凋亡与死亡过程中的特征和机制奠定了基础。我们在体外培养血管内皮细胞EAhy926,将不同浓度的蟾蜍灵作用细胞072小时,结果发现蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有明显的抑制作用;且在0.06251μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48 h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的“凋亡峰”,凋亡率8.2%36.5%,且呈时间依赖性(P<0.01);细胞周期分析显示,0.1μmol/L蟾蜍灵能显著影响血管内皮细胞EAhy926的细胞周期,在0-36 h范围内G0/G1期细胞比例随药物作用时间的延长而逐渐递减,而S期细胞比例随药物作用时间的延长而逐渐增高,呈时间依赖性变化(P<0.05);半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱(P<0.05),且二者均呈剂量依赖性。激光共聚焦显微镜下观察到蟾蜍灵可使EAhy926细胞内Na+浓度升高,K+浓度降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。本研究结果表明蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与抑制钠泵作用,上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关。

全文目录


中文摘要  3-4ABSTRACT  4-8第一章 综述  8-13  1.1 钠泵  8-10    1.1.1 钠泵的结构和功能  8-9    1.1.2 钠泵与疾病的关系  9-10  1.2 蟾蜍灵的研究现状  10-11  1.3 课题的提出  11-13第二章 血管内皮细胞EAhy926 的培养  13-18  2.1 实验仪器与材料  13    2.1.1 实验仪器  13    2.1.2 实验材料  13  2.2 实验方法  13-18    2.2.1 常用溶液的配置  13-15    2.2.2 细胞培养及实验分组  15    2.2.3 蟾蜍灵对血管内皮细胞 EAhy926 生长曲线的影响  15-16      2.2.3.1 实验方法与步骤  15-16      2.2.3.2 实验结果  16    2.2.4 MTT 法测定蟾蜍灵对EAhy926 细胞生长的影响  16-18      2.2.4.1 实验方法与步骤  16      2.2.4.2 实验结果  16-18第三章 蟾蜍灵作用EAhy926 细胞的形态学观察  18-23  3.1 实验仪器与材料  18-19    3.1.1 实验仪器  18    3.1.2 实验材料  18-19  3.2 实验方法  19-20    3.2.1 倒置光显微镜观察  19    3.2.2 荧光显微镜观察  19    3.2.3 透射电子显微镜下观察超微结构的变化  19-20  3.3 实验结果  20-23    3.3.1 倒置光显微镜观察结果  20    3.3.2 荧光显微镜观察结果  20-21    3.3.3 透射电子显微镜下观察超微结构的变化结果  21-23第四章 流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡  23-28  4.1 实验仪器与材料  23    4.1.1 实验仪器  23    4.1.2 实验材料  23  4.2 实验方法与步骤  23-27    4.2.1 流式细胞仪测定蟾蜍灵对EAhy926 细胞周期的影响  24-25    4.2.2 流式细胞仪测定蟾蜍灵对EAhy926 细胞的凋亡比率  25-27  4.3 小结  27-28第五章 蟾蜍灵对EAhy926 细胞内游离Ca~(2+)、Na~+、K~+的影响  28-33  5.1 实验仪器与材料  28    5.1.1 实验仪器  28    5.1.2 实验材料  28  5.2 细胞内Ca~(2+)浓度的改变  28-29    5.2.1 实验方法  28-29    5.2.2 实验结果  29  5.3 细胞内Na+浓度的改变  29-31    5.3.1 实验方法  29-30    5.3.2 实验结果  30-31  5.4 细胞内K+浓度的改变  31-32    5.4.1 实验方法  31    5.4.2 实验结果  31-32  5.5 小结  32-33第六章 不同浓度蟾蜍灵对钠泵亚单位表达的影响  33-38  6.1 实验仪器与材料  33    6.1.1 实验仪器  33    6.1.2 实验材料  33  6.2 蟾蜍灵浓度依赖性上调α1 亚单位mRNA 表达  33-36    6.2.1 实验方法  33-35    6.2.2 实验结果  35-36  6.3 蟾蜍灵浓度依赖性下调β1 亚单位mRNA 表达  36-37    6.3.1 实验方法  36    6.3.2 实验结果  36-37  6.4 小结  37-38第七章 蟾蜍灵对EAhy926 细胞Caspase3Bcl-2 m RNA 表达的影响  38-43  7.1 实验仪器与材料  38-39    7.1.1 实验仪器  38    7.1.2 实验材料  38-39  7.2 蟾蜍灵浓度依赖性上调Caspase3 m RNA 表达  39-41    7.2.1 实验方法  39-40    7.2.2 实验结果  40-41  7.3 蟾蜍灵浓度依赖性下调Bcl-2 mRNA 表达  41-42    7.3.1 实验方法  41    7.3.2 实验结果  41-42  7.4 小结  42-43第八章 结论  43-44参考文献  44-47致谢  47

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