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人参皂苷Rg1对优化培养的人脐血MSCs增殖、分泌功能与ERK、p38信号分子的影响

作　者: 袁毅
导　师: 余丽梅
学　校: 遵义医学院
专　业: 药理学
关键词: 脐血间充质干细胞 免疫表型 增殖 分化 人参皂苷Rg1 人脐血间充质细胞 钙敏感受体 细胞增殖 分泌
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的观察两种培养基序贯培养人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells, hUCB-MSCs),及其对hUCB-MSCs基本生物学特性的影响。方法密度梯度离心法获取脐血单个核细胞,以DMEM/F12和Oricell人脐带间充质干细胞培养基(Oricell human umbilical cord mesenchymal stem cell growth medium, OHUCMSCG)序贯培养hUCB-MSCs,免疫细胞化学及流式细胞术检测其标志蛋白,MTT法检测细胞增殖,绘制生长曲线,茜素红与油红染色鉴定其向成骨、成脂细胞分化潜能。结果DMEM/F12原代培养hUCB-MSCs,克隆形成率高,继续用DMEM/F12传代培养hUCB-MSCs至第2代,有利于利用差速贴壁方式纯化细胞；第三代以后改用OHUCMSCG序贯培养hUCB-MSCs至第8代,细胞均呈梭形、成纤维细胞样,旋涡辐射状排列,并表达CD29、CD44、CD73、CD166和波形蛋白,而不表达CD34和CD45；第6代hUCB-MSCs生长、增殖状态良好,倍增时间为68.11h,对数生长期为2-5d；在适宜条件下,培养21d,可被诱导分化为骨结节茜素红染色阳性的成骨细胞和脂滴油红染色阳性的成脂细胞。结论DMEM/F12和OHUCMSCG培养基序贯培养可成功培养hUCB-MSCs,并使其保持良好的基本生物学特性。目的：观察人参皂苷Rg1(Rg1)对人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells, hUCB-MSCs)增殖的影响,以钙敏感受体(calcium-sensing receptor, CaSR)为靶点,探讨Rgl可能的作用机制。方法：取P5至P6代hUCB-MSCs随机分为8组：空白对照组、Rgl由低至高5个剂量组及Rg1+阻断剂组(CdCl2)和阻断剂组,MTT法观察Rg1对细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子含量,RT-PCR和Western blot技术检测hUCB-MSCs CaSR的mRNA及p-P38和p-ERK蛋白的表达；免疫荧光染色检测CaSR受体。结果：与对照组相比, Rg1各剂量组对hUCB-MSCs的增殖无明显影响(P>0.05)；0.01 mmol/L CdCl2则可明显抑制hUCB-MSCs增殖(P<0.05),且不能被Rg1所逆转。与空白组比较,Rgl各剂量组培养上清液中的IL-8、IL-6、LIF和TGF-β1含量无显著差异(P>0.05),但hUCB-MSCs与0.01 mmol/L的CdCl2-Rg1 3μmol/L共同培养72 h,上述细胞因子含量呈降低趋势,以IL-6、LIF降低最为显著,其余几种细胞因子含量均低于检测下限(P<0.05)。空白组hUCB-MSCs CaSR mRNA为低表达；与空白组相比,Rgl 1u mol/L和3μmol/L组及CdCl20.01 mmol/L+ Rg1 1μmol/L对hUCB-MSCs CaSR mRNA表达无明显差异(P>0.05)。免疫荧光染色结果显示,Rgl对CaSR表达的影响与空白对照组无显著差别。Western blot检测结果显示,与空白组比较,Rg1 3μmol/L、CdCl2 0.01 mmol/L+Rg1 1μmol/L合用组均可明显降低p-ERK蛋白和p-p38蛋白表达。结论：1.Rg1对hUCB-MSCs增殖和CaSR表达无明显影响,2.hUCB-MSCs可分泌IL-8、IL-6、LIF和TGF-β1,不分泌或低分泌IL-7、IL-12、SCF、GM-CSF和M-CSF, Rgl对上述分泌功能无明显影响。3.Rg1可下调p-ERK和p-p38蛋白水平,不影响CaSR表达,提示Rg1可能通过下调ERK和p38蛋白活性,影响hUCB-MSCs其他生物学特性。

全文目录


英文缩略词表  4-8第一部分:两种培养基序贯培养人脐血间充质干细胞  8-24  中文摘要  8-9  英文摘要  9-11  前言  11-12  材料与方法  12-16  结果  16-22  讨论  22-24第二部分:人参皂苷Rg1对hUCB-MSCs增殖、分泌功能与ERK、p38信号分子的影响  24-52  中文摘要  24-25  英文摘要  25-27  前言  27-29  材料与方法  29-41  结果  41-50  讨论  50-52结论  52-53参考文献  53-57综述:间充质干细胞的分泌功能  57-67  参考文献  63-67致谢  67-68作者简介  68

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