学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

昂丹司琼等药物体外代谢酶及代谢产物对照品制备研究

作　者: 李欣南
导　师: 黄海华
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 药物代谢 rCYP酶格列齐特昂丹司琼 LC-MS~n 微生物转化
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 29次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文以重组人CYP酶(rCYP)和混合肝微粒体为工具，格列齐特与昂丹司琼药物为研究对象，通过液相色谱-串联质谱(LC-MS~n)技术检测残留原形药物及其主要代谢产物，采用化学抑制和酶相对活性方法评估各种CYP酶单体在体外药物代谢中的相对贡献大小；并利用微生物转化模型制备了昂丹司琼手性代谢产物的对照品。以rCYP相对贡献为指标的体外研究表明，格列齐特的主要代谢为6β-羟基化和甲基羟化反应，CYP2C9在6β-羟基化代谢中占主要地位(84.0％)，甲基羟化代谢只有CYP2C9和CYP2C19介入，前者贡献占绝对优势(93.2％)，通过化学抑制方法进一步证明CYP2C9是格列齐特体外羟化反应的主要代谢酶。以rCYP相对贡献为指标的体外研究表明，CYP1A2和2D6在R-昂丹司琼的7-羟基化中发挥重要作用(38.64％，27.13％)，CYP1A2和2C9在S-昂丹司琼的7-羟基化中发挥重要作用(38.99％，33.57％)，CYP2C9在两种异构体的N-去甲基化代谢中发挥重要作用(76.23％，91.12％)。通过化学抑制方法证明CYP2C9在两种昂丹司琼异构体的7-羟基化和N-去甲基化代谢中发挥重要作用。由5种rCYP催化R-，S-昂丹司琼上述两种氧化反应求得的酶促动力学参数均存在差异，初步确定R-，S-昂丹司琼的体外代谢存在立体选择性差异。在外消旋昂丹司琼的代谢研究中发现，CYP1A2和CYP2C9是外消旋昂丹司琼7-羟基化反应的主要代谢酶(44.62％，31.30％)；CYP2C9为外消旋昂丹司琼N-去甲基化反应的主要代谢酶(88.22％)。建立了卷枝毛霉A S3.3421的转化模型并优化转化条件，获得良好的制备转化体系，为人体药物代谢研究提供了1-羟基昂丹司琼对映异构体对照品，显示出微生物转化模型在制备人体手性药物代谢对照品方面的特有优势。建立的另一个微生物转化模型短刺小克银汉霉AS 3.153，可将昂丹司琼转化为7-羟基昂丹司琼和N-去甲基昂丹司琼，亦为人体内的代谢产物。

全文目录

摘要  11-12
ABSTRACT  12-13
第一章前言  13-21
  1.1 药物代谢  13
  1.2 细胞色素P450的发现  13-17
    1.2.1 细胞色素P450的命名  14-15
    1.2.2 细胞色素P450的作用机制  15-16
    1.2.3 人体主要的细胞色素P450  16-17
    1.2.4 真菌细胞色素P450  17
  1.3 药物代谢体外研究的主要方法  17-18
  1.4 药物代谢酶的确定及其在药物研发中的意义  18-19
  1.5 微生物转化法在药物代谢研究中的地位  19-20
  1.6 本文研究目的  20-21
第二章实验材料与基本方法  21-25
  2.1 实验材料  21-23
    2.1.1 微粒体及重组酶  21
    2.1.2 菌种  21
    2.1.3 培养基  21-22
    2.1.4 药品与试剂  22
      2.1.4.1 药品  22
      2.1.4.2 试剂  22
    2.1.5 主要仪器设备  22-23
  2.2 实验基本方法  23-25
    2.2.1 孵育体系的建立  23
      2.2.1.1 混合肝微粒体孵育  23
      2.2.1.2 重组酶孵育  23
    2.2.2 数据处理  23-24
    2.2.3 转化菌株孢子和种子的制备  24
    2.2.4 基本转化系统  24
    2.2.5 制备对照品的转化系统  24
    2.2.6 样品预处理及典型代谢产物分析  24-25
第三章格列齐特体外药物代谢酶研究  25-34
  3.1 格列齐特  25-26
  3.2 格列齐特代谢产物检测  26-27
    3.2.1 样品预处理  26
    3.2.2 色谱条件  26
    3.2.3 质谱条件  26-27
  3.3 实验结果  27-33
    3.3.1 格列齐特代谢产物的LC-MS~n分析  27-29
    3.3.2 格列齐特体外动力学研究  29-31
      3.3.2.1 孵育体系时间的线性考察  29-30
      3.3.2.2 孵育体系蛋白浓度的线性考察  30
      3.3.2.3 Michaelis-Menten动力学研究  30-31
    3.3.3 确证介导格列齐特羟化反应的主要CYPs类型  31-32
    3.3.4 格列齐特羟化反应的化学抑制  32-33
  3.4 讨论  33-34
第四章 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼体外药物代谢酶研究  34-43
  4.1 昂丹司琼  34
  4.2 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼代谢产物检测  34-35
    4.2.1 样品预处理  34
    4.2.2 色谱条件  34-35
    4.2.3 质谱条件  35
  4.3 实验结果  35-41
    4.3.1 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼代谢产物LC-MS~n分析  35-36
    4.3.2 Michaelis-Menten动力学研究  36-39
    4.3.3 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼两种代谢反应的主要CYPs类型  39-40
      4.3.3.1 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼的7-羟基化反应的主要CYPs类型  39
      4.3.3.2 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼的N-去甲基化反应的主要CYPs类型  39-40
    4.3.4 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼两种代谢反应的化学抑制  40-41
      4.3.4.1 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼的7-羟基化反应的抑制  40-41
      4.3.4.2 R-昂丹司琼和S-昂丹司琼的N-去甲基化反应的抑制  41
  4.4 讨论  41-43
第五章外消旋昂丹司琼体外代谢初步研究  43-47
  5.1 外消旋昂丹司琼代谢产物检测  43
    5.1.1 样品预处理  43
    5.1.2 色谱条件  43
    5.1.3 质谱条件  43
  5.2 实验结果  43-46
    5.2.1 外消旋昂丹司琼代谢产物LC-MS~n分析  43-44
    5.2.2 Michaelis-Menten动力学研究  44-45
    5.2.3 介导外消旋昂丹司琼两种主要代谢反应的CYPs类型确定  45-46
  5.3 讨论  46-47
第六章微生物转化法制备昂丹司琼代谢产物对照品  47-57
  6.1 昂丹司琼微生物转化产物检测  47
    6.1.1 生物样品预处理  47
    6.1.2 色谱条件  47
    6.1.3 质谱条件  47
  6.2 实验结果  47-56
    6.2.1 短刺小克银汉霉AS 3.153转化产物的LC-MS~n分析  47-48
    6.2.2 卷枝毛霉AS 3.3421转化产物的LC-MS~n分析  48-49
    6.2.3 昂丹司琼转化活性菌株的筛选  49-50
    6.2.4 短刺小克银汉霉AS 3.153转化昂丹司琼的研究  50-51
      6.2.4.1 底物浓度对转化的影响  50-51
      6.2.4.2 短刺小克银汉霉AS 3.153昂丹司琼转化系统的优化  51
    6.2.5 卷枝毛霉AS 3.3421转化昂丹司琼的研究  51-52
      6.2.5.1 底物浓度对转化的影响  51
      6.2.5.2 卷枝毛霉AS 3.3421转化昂丹司琼的优化系统  51-52
    6.2.6 卷枝毛霉AS 3.3421转化产物的分离纯化  52-53
    6.2.7 卷枝毛霉AS 3.3421转化产物的结构鉴定  53-56
  6.3 讨论  56-57
第七章结论  57-59
参考文献  59-62
致谢  62-63
附图  63-64

昂丹司琼等药物体外代谢酶及代谢产物对照品制备研究

内容摘要

全文目录

相似论文