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玉屏风汤主要成分大鼠药动学研究

作　者: 郑世瑞
导　师: 李俊
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药剂学
关键词: 玉屏风 HPLC-MS 药物代谢动力学房室模型黄芪甲苷白术内酯-Ⅰ 升麻苷
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

中药是依据中医药理论,在长期的临床治疗经验的基础上总结出来的有效方剂,多以复方给药治疗疾病,是典型的复杂系统。目前记载的中药种类已达12 807种,我国医学的伟大宝藏,但迄今为止,中药还没有真正进入国际医药主流市场。究其原因,中药经验的东西多,真正的有效成分或有效部位还没有完全搞清楚,质控标准制定困难,药效学和安全评价及临床研究比较滞后。在现代医药迅猛发展的今天,中药要想全面进入国际市场,首先必须弄清楚中药化学成分与药效作用机理之间的关系,这就要深入研究中药在体内的变化过程,即进行中药药代动力学研究,了解中药有效成分在体内的吸收、分布、代谢和排泄及药理、毒理性质。玉屏风源于元代《丹溪心法》,由黄芪、白术、防风3味药组成。方中黄芪为君药,白术为臣药,防风为佐药,组方比3：1：1,是中医扶正固本的经典方剂,临床主要用于反复发作的呼吸道感染、支气管哮喘等呼吸系统疾病。本研究以玉屏风汤为工具药,依据已报道的药效学研究结果和中国药典,在中医药理论的指导下,选取3味药的主要活性成分：黄芪甲苷、白术内酯-I和升麻苷作为研究对象,开展玉屏风的质量控制新方法的探讨和主要活性成分药物动力学研究,旨在得出君药黄芪甲苷在不同组别中的药动学参数,从药动学角度探讨玉屏风组方的配伍机制。本研究的具体内容包括以下两个部分：第一部分玉屏风汤中黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷含量的测定本研究建立了同时测定玉屏风汤中黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷含量的方法。方法建立的过程中,比较了不同比例的甲醇-水、乙腈-水流动相体系,选定色谱条件；采用仪器tuning文件优化的条件,对标准品进行Scan、阳离子和阴离子监测扫描,参考已发表的研究报告,选定质谱条件。最终优化确定的色谱质谱条件为：Hedera ODS-2 (2.0mm×150mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇：水(68:32,v:v),流速0.2mL/min;电喷雾电离(ESI+),选择性离子监测(SIM)质荷比807.50,287.05,469.05的离子对,内标为替米沙坦。方法学考察实验得出黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷的精密度RSD均小于5%,黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷含量的加样回收率分别为95.47%、101.94%和103.70。该方法方便、快捷、稳定,可同时测定汤中3味药主成分的含量,结果准确可靠。本实验定量了汤中的3味药的主成分,为玉屏风主成分体内药动学研究提供了理论基础。第二部分HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中的黄芪甲苷和白术内酯-Ⅰ浓度及药动学研究本研究建立了同时测定大鼠血清中黄芪甲苷和白术内酯-Ⅰ含量的方法。方法建立的过程中参照已建立的同时测定玉屏风汤中黄芪甲苷和白术内酯-Ⅰ含量的方法条件,对质谱条件进行了优化；考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水流动相体系和梯度洗脱,选定色谱条件；考察了不同比例乙醚、乙酸乙酯的液液萃取方法,不同洗脱剂组成的固相萃取方法,甲醇、乙腈沉淀蛋白法,同时考察了内标地西泮和替米沙坦,最终选定内标和血浆样品前处理方法。最终优化确定的色谱质谱条件为：Hedera ODS-2 (2.0mm×150mm,5μm)色谱柱,流动相体系为流动相A：0.01%乙酸水溶液和流动相B：甲醇,采用梯度洗脱,流速0.2mL/min;电喷雾电离(ESI+),选择性离子监测(SIM)质荷比为807.35,287.05,469.05的离子对,内标为地西泮。通过方法学实验得出日内、日间精密度RSD均小于15%,黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷回收率稳定且大于70%。该方法方便、快捷、稳定,可同时测定大鼠血清中黄芪甲苷和白术内酯-Ⅰ的含量,结果准确可靠。“君臣佐使”是方剂的组方原则。君药在中医药理论中被认为是治疗疾病的主要成分。因此,在开展药动学研究时,重点关注君药活性成分的药动学特征及变化。实验设计分为3组：第一组：君药(黄芪甲苷),第二组：君药+臣药(黄芪甲苷+白术内酯-Ⅰ),第三组：君药+臣药+佐药(黄芪甲苷+白术内酯-Ⅰ+升麻苷)。给药剂量的确定来自于已报道的黄芪甲苷单体(20mg/kg)药动学给药剂量,根据黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷在汤中的含量比例得出白术内酯-Ⅰ(2.16495mg/kg)和升麻苷(569.9 mg/kg)的给药剂量。但由此得出的升麻苷给药剂量过大,最终选择升麻苷LD50(116.9 mg/kg)作为给药剂量。将各单体配成CMC-Na混悬液灌胃给药,开展药动学研究。采用WinNonlin软件,非房室模型拟合药动学参数。结果如下：黄芪甲苷组(Tmax:2.1±0.55,Cmax:34±7.58,AUC0-24:263.14±100.59,MRT:6.38±1.54,t1/2:4.42±1.83):黄芪甲苷+白术内酯-Ⅰ组(Tmax" 2.4±1.78,Cmax:53.6±12.70,AUC0-24:549.81±190.67,MRT:8.24±1.84,t1/2: 5.274±1.78):黄芪甲苷+白术内酯-Ⅰ+升麻苷组(Tmax:3.6±0.55,Cmax:59.6±20.74,AUC0-24:475.00±70.54,MRT:7.24±0.79,t1/2:5.48±0.62).

全文目录

英文缩略词表  9-11
中文摘要  11-15
  参考文献  14-15
英文摘要  15-19
前言  19-26
  1 研究背景  19-21
    1.1 玉屏风的来源  19
    1.2 玉屏风的药理作用  19-20
    1.3 玉屏风的临床应用  20
    1.4 玉屏风的主要活性成分  20-21
    1.5 中药复方药动学的研究背景及意义  21
  2 研究目的  21
  3 研究意义  21-23
  参考文献  23-26
第一部分玉屏风汤中黄芪甲苷、白术内酯-Ⅰ和升麻苷含量的测定  26-41
  中文摘要  26-27
  英文摘要  27-28
  1 前言  28-29
  2 实验材料  29-30
    2.1 药品和试剂  29-30
    2.2 仪器与设备  30
  3 方法与结果  30-36
    3.1 色谱质谱条件  30-31
    3.2 溶液的制备  31-32
      3.2.1 对照品溶液  31
      3.2.2 混合对照品溶液  31
      3.2.3 内标溶液  31
      3.2.4 玉屏风汤剂  31
      3.2.5 供试品溶液  31-32
    3.3 方法学考察  32-36
      3.3.1 特异性考察实验  32
      3.3.2 线性关系考察  32-34
      3.3.3 精密度实验  34-35
      3.3.4 重复性实验  35
      3.3.5 稳定性实验  35
      3.3.6 加样回收率实验  35-36
      3.3.7 样品含量测定  36
  4 讨论  36-39
    4.1 色谱、质谱条件选择  36-37
    4.2 样品含量测定  37-39
  参考文献  39-41
第二部分 HPLC-MS同时测定大鼠血清中的黄芪甲苷和白术内酯-Ⅰ的浓度及药动学研究  41-65
  中文摘要  41-42
  英文摘要  42-43
  1 前言  43
  2 实验材料  43-45
    2.1 药品和试剂  44
    2.2 仪器与设备  44
    2.3 生物样品的来源  44-45
  3 实验方法  45-47
    3.1 灌胃溶液的制备  45
    3.2 药动学给药方案及取血  45
    3.3 内标溶液的配制  45
    3.4 血清样品的处理  45
    3.5 标准曲线的配制  45-46
    3.6 质控样品的配制  46
    3.7 流动相的配制  46
    3.8 色谱质谱条件  46-47
  4 方法学考察  47-53
    4.1 特异性考察实验  47-49
    4.2 基质效应考察  49
    4.3 标准曲线及定量下限  49-51
    4.4 精密度与准确度  51-52
    4.5 提取回收率  52
    4.6 稳定性考察  52-53
    4.7 方法学质控  53
  5 结果  53-60
    5.1 黄芪甲苷的药动学研究  53-59
      5.1.1 黄芪甲苷给药组  53-54
      5.1.2 黄芪甲苷+白术内酯-Ⅰ给药组  54-57
      5.1.3 黄芪甲苷+白术内酯-Ⅰ+升麻苷给药组  57-59
    5.2 黄芪甲苷的药动学参数  59-60
  6 讨论  60-62
    6.1 质谱条件的选择  60-61
    6.2 色谱条件的选择  61
    6.3 内标的选择  61
    6.4 样品处理方法的选择  61
    6.5 臣药、佐药的药动学配伍机制  61-62
    6.6 研究中存在的问题  62
  结论  62-63
  参考文献  63-65
附录  65-67
致谢  67-69
综述  69-75
  参考文献  74-75

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