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苦参碱对缺血性神经元损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号的机制

作　者: 洪荔枝
导　师: 张慧灵
学　校: 苏州大学
专　业: 药理学
关键词: 苦参碱 脑缺血 神经保护 神经元 细胞凋亡 NF-κB IκBα p53 c-Myc
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究苦参碱(Matrine)对缺血性神经元损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号的机制。方法:采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion, pMCAO)方法,建立脑缺血的大鼠模型。采用原代培养大脑皮层神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)方法,建立脑缺血的细胞模型。免疫荧光法和LDH法分别检测OGD诱导的神经元MAP2阳性细胞数和乳酸脱氢酶漏出率;Hoechst33258染色观察Matrine对缺血神经元凋亡的影响。Western Blot方法检测Matrine对缺血区NF-κB信号通路相关蛋白IκBα,NF-κB p65表达的影响。免疫荧光双标记法分析MAP2阳性神经元NF-κB的核转位。Real Time PCR测定OGD诱导的神经元p53和c-Myc mRNA的表达。结果:LDH结果显示Matrine (50-200μM)能剂量依赖性地降低神经元OGD12h后LDH的漏出率(P<0.01)。免疫荧光法结果显示OGD 12 h模型组MAP2阳性细胞数较正常组明显减少(P<0.01),Matrine可明显增加MAP2阳性细胞数(P< 0.05, P< 0.01)。Hoechst33258染色结果显示OGD12h凋亡细胞明显增多(P<0.01),Matrine可明显减少凋亡细胞的数量(P< 0.05, P< 0.01)。Western Blot结果显示,与假手术组相比,在大脑中动脉阻塞3h,6h,12h,24h后,缺血区IκBα的表达水平在3h开始下降,12h达到最低,24h又开始上升;而细胞核NF-κB p65的表达水平在3h开始上升,12h达到峰值,24h又开始下降。静脉注射Matrine后,Matrine (12.5-50 mg/kg)组明显升高了缺血区IκBα的表达水平,而降低了NF-κB p65的表达水平,并呈现一定的剂量依赖性。Western Blot结果显示,神经元在OGD0h, 1h,3h,6h,12h后,IκBα的表达水平随OGD时间延长逐渐降低,在12h达到最低;而神经元细胞核NF-κB p65的表达水平在1h开始上升,12h达到峰值。给与Matrine后,Matrine (50-200μM)能剂量依赖性地升高神经元IκBα的表达水平,降低神经元细胞核NF-κB p65的表达水平。免疫荧光结果进一步显示: OGD 3h神经元NF-κB的核转位显著增加,6-12h达高峰(P<0.01);Matrine可显著抑制OGD 12h诱导的神经元NF-κB p65核转位(P< 0.05, P< 0.01)。Real Time PCR结果显示:与NF-κB p65核转位的高峰时间相一致,OGD 12h明显诱导神经元NF-κB的靶基因p53和c-MycmRNA表达(P<0.01),而Matrine可显著下调p53和c-Myc mRNA的表达(P< 0.05, P< 0.01)。结论:1.证实了Matrine对缺血性神经元损伤具有直接保护作用,并能抑制神经元细胞凋亡。2. Matrine的神经保护作用可能与抑制神经元NF-κB信号通路激活及其促凋亡靶基因p53和c-Myc mRNA的表达有关。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-15
第一部分 苦参碱对缺血性神经元损伤的直接保护作用  15-27
  材料与方法  15-20
  结果  20-26
  小结  26-27
第二部分 苦参碱保护缺血性神经元的机制-抑制NF-κB 信号通路  27-54
  一 Matrine 对pMCAO 诱导的缺血区NF-κB 信号通路激活的影响  28-37
    材料与方法  28-33
    结果  33-37
  二 Matrine 对 OGD 诱导的原代培养神经元损伤中 NF-κB 信号通 路激活的影响  37-53
    （一） OGD 诱导的神经元损伤中 NF-κB 信号通路激活的时程变化  37-46
      材料与方法  37-42
      结果  42-46
    （二） Matrine 对 OGD 诱导的神经元损伤中 NF-κB 信号通路激活的影响  46-53
      材料与方法  46-48
      结果  48-53
  小结  53-54
讨论  54-57
结论  57-58
参考文献  58-64
附录一 综述  64-78
附录二 英文缩写词表  78-79
攻读硕士学位期间公开发表的论文  79-80
致谢  80-81

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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