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类风湿关节炎外周血破骨细胞活性研究

作　者: 黄少辉
导　师: 陈君敏
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 类风湿关节炎外周血单个核细胞破骨细胞前体细胞破骨细胞肿瘤坏死因子α 破骨前体细胞甲氨蝶呤
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

第一部分类风湿关节炎外周血破骨细胞活性的研究目的:研究类风湿关节炎(RA)患者外周血破骨细胞前体细胞(OCP)分化能力及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。方法:取7例RA患者和9名健康对照的外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),采用RANKL和M-CSF体外诱导培养破骨细胞(OC)。对培养14天后的细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,计数TRAP染色阳性、胞核≥3个的细胞(定义为OC)。骨吸收实验考察OC的功能。运用ELISA方法检测15例RA患者和9名健康对照血清TNF-α水平。对RA患者OC数量和TNF-α水平与疾病活动性指标包括红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)进行相关分析。结果:(1)RA患者外周血生成OC数量显著高于健康对照,分别为27.8±10.8个/10个视野(±SD)和14.4±6.1个/10个视野(P<0.05);(2)RA患者TNF-α水平显著高于健康对组,分别为18.8±5.2 pg/ml和9.5±3.0 pg/ml(P<0.05);(3)RA患者OC数量与ESR正相关(r=0.912,p=0.000),与CRP无显著相关性;(4)RA患者外周血TNF-α水平与ESR显著正相关(r=0.936,p=0.000),与CRP无显著相关性;(5)RA患者外周血TNF-α水平与OC数量显著正相关(r=0.913,p=0.000)。结论:RA患者外周血OCP数量显著增高,血清TNF-α水平显著增高,二者可能是造成炎症局部OC活性增高进而引起关节骨质破坏的机制。第二部分甲氨蝶呤对类风湿关节炎外周血破骨细胞活性的影响目的:研究甲氨喋呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)外周血破骨细胞前体细胞(OCP)分化能力及外周血单个核细胞(PBMCs)分泌TNF-α的影响。方法:采集3例健康志愿者者PBMCs,在含不同浓度(0 nM、1 nM、10 nM、102 nM、103 nM和104 nM)的MTX的培养液中培养24、48、72小时,采用CCK8方法检测细胞活力。采用RANKL和M-CSF诱导PBMCs使其向OC分化,在培养液中加不同浓度(1 nM、10 nM和102 nM)MTX,14天后对细胞进行TRAP染色,计数TRAP染色阳性、胞核≥3个的细胞(定义为OC)。收集48小时的培养上清液,运用ELISA方法检测其TNF-α水平。结果:(1)用CCK8检测显示较低浓度(1 nM、10 nM和102 nM)MTX对细胞活力影响不大,与对照组(0 nM)无显著差别。较高浓度MTX(103 nM和104 nM)使细胞活力显著降低;(2)10 nM和102 nM的MTX加入OC培养体系,产生OC的数量显著低于对照组,分别为26.3±7.6(±SD)、13.6±6.0和35.8±6.6个/10个视野(P<0.05);(3)10 nM和102 nM的MTX加入OC培养体系,培养上清液中的TNF-α水平也较对照组(0 nM)显著降低,分别为45.3±4.7、39.9±3.0和101.3±1.5 pg/ml(P<0.05)。结论:MTX抑制PBMCs向OC分化,也抑制PBMCs分泌TNF-α,可能是其治疗RA的重要作用机制。

全文目录

英文缩略语  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
第一部分类风湿关节炎外周血破骨细胞活性的研究  12-24
  材料与方法  12-18
  结果  18-22
  讨论  22-23
  结论  23-24
第二部分甲氨蝶呤对类风湿关节炎外周血破骨细胞活性的影响  24-31
  材料与方法  24-26
  结果  26-29
  讨论  29-30
  结论  30-31
参考文献  31-34
致谢  34-35
综述  35-42
  参考文献  40-42

类风湿关节炎外周血破骨细胞活性研究

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