学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

利用抑制差减杂交技术鉴定茄子单性结实相关ESTs

作　者: 周亚君
导　师: 刘富中
学　校: 中国农业科学院
专　业: 蔬菜学
关键词: 茄子(Solanum melongena L.) 单性结实抑制差减杂交荧光定量PCR RACE
分类号: S641.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 100次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

茄子在设施栽培和露地早春栽培时,常由于低温弱光引起开花期授粉受精不良,容易导致落花落果,降低产量,而茄子单性结实特性能克服低温引起的落花落果障碍,增强座果能力,显著提高产量,同时还可以改进果实质量、降低栽培成本。因此,茄子单性结实特性的研究及其单性结实相关基因的分离与克隆,对指导单性结实品种的育种工作,选育耐低温、适宜设施栽培和露地早春栽培、优质无籽或少籽的茄子品种,具有重要的意义。本试验以茄子(Solanum melongena L.)单性结实品系D-10和非单性结实品系03-2的子房cDNA分别作为实验组(Tester)和对照组(Driver),利用抑制差减杂交技术(SSH)研究了茄子单性结实基因相关ESTs;通过荧光定量PCR技术研究了两个目的基因在早期果实发育中的表达变化;通过RACE技术对Auxin growth promotor protein基因进行了3’-RACE扩增,获得了该基因3’端771bp的片段,并对该片段进行了序列分析。其主要研究结果如下:1.利用抑制差减杂交(SSH)技术构建了正反两个SSH-cDNA文库,分别包含472和124个克隆,共获得384个Unique ESTs,其中121个ESTs与非冗余蛋白质数据库中已知功能的蛋白质具有高度的相似性,另外136个ESTs代表了未知功能基因。2.在功能已知的ESTs中,包括一些与果实生长发育相关的基因,如生长素增长启动子蛋白基因和扩张蛋白基因;与花器官发育相关的基因,如MADS-box转录因子家族和锌指蛋白基因;与信号传导相关基因,如MAPKK基因和WRKY转录因子基因。3.获得与单性结实相关的EST有5条: 2条ESTs属于MADS-box转录因子家族、1条与生长素增长蛋白同源、1条属于p450还原酶系、1条属于MAPKK家族。4. Auxin Growth Promotor Protein基因在单性结实和非单性结实品系中的表达模式不同。该基因在单性结实品系D-10中表达模式是升高-降低-升高,花后20 d表达量最高。在非单性结实品系03-2中的表达模式是在开花当天不表达,之后持续升高,花后20 d表达量最高;Auxin Growth Promotor Protein基因在单性结实品系果实发育中的表达量均高于非单性结实品系。Auxin Growth Promotor Protein基因与生长素合成基因的表达密切相关。5. MADS-box SEPALLATA3基因在单性结实和非单性结实品系中的表达模式不同。在单性结实品系D-10中表达模式是升高-降低-升高,花后20d表达量最高。在非单性结实品系03-2中的表达模式是开花当天不表达,之后持续升高,花后20d表达量最高。MADS-box SEPALLATA3基因可能具有通过上调表达促进茄子单性结实的作用。6.通过3’- RACE方法获得Auxin Growth Promotor Protein基因的3’端序列,共771 bp ,具有完整的3’端polyA结构,与番茄中假定的生长素增长启动子蛋白( putive auxin growth promotor protein)氨基酸一致性最高,达到94%。该蛋白具有一个保守结构域,为GDP-海藻糖蛋白盐藻糖基转移酶。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-11
第一章引言  11-22
  1.1 单性结实  11-14
    1.1.1 单性结实概念及分类  11
    1.1.2 几种植物单性结实的相关研究  11-13
    1.1.3 单性结实转基因研究  13
    1.1.4 温度和植物激素与单性结实的关系  13-14
  1.2 抑制差减杂交技术原理及其在植物差异表达研究中的应用  14-20
    1.2.1 SSH 原理  14-15
    1.2.2 SSH 技术的主要步骤  15-16
    1.2.3 SSH 技术在植物差异表达研究中应用  16-20
  1.3 研究目的与意义  20
  1.4 主要研究内容  20-21
  1.5 技术路线  21-22
第二章差减 cDNA 文库的构建与序列分析  22-49
  2.1 试验材料  22
    2.1.1 试验材料  22
    2.1.2 主要生化试剂  22
  2.2 试验方法  22-33
    2.2.1 总RNA 的提取  22-23
    2.2.2 cDNA 合成  23-26
    2.2.3 SSH 文库的构建  26-33
  2.3 结果与分析  33-46
    2.3.1 总RNA 的提取  33
    2.3.2 cDNA 的合成  33-34
    2.3.3 SSH 文库的构建  34-38
    2.3.4 ESTs 序列分析  38-45
    2.3.5 功能分类  45-46
  2.4 讨论  46-49
第三章候选基因的荧光定量PCR 分析  49-56
  3.1 试验材料  49
    3.1.1 试验材料  49
    3.1.2 主要生化试剂  49
  3.2 试验方法  49-51
    3.2.1 总RNA 提取  49
    3.2.2 cDNA 第一链的合成  49
    3.2.3 内参基因的筛选  49-50
    3.2.4 内参基因ubiquitin 标准曲线的绘制  50
    3.2.5 荧光定量PCR 检测  50-51
  3.3 结果与分析  51-54
    3.3.1 总RNA 的提取  51
    3.3.2 内参基因的筛选  51-52
    3.3.3 内参基因ubiquitin 标准曲线的绘制  52-53
    3.3.4 荧光定量PCR 分析候选基因的表达  53-54
  3.4 讨论  54-56
第四章通过RACE 获得单性结实相关基因序列  56-63
  4.1 试验材料  56
    4.1.1 试验材料  56
    4.1.2 主要生化试剂  56
  4.2 试验方法  56-58
    4.2.1 总RNA 提取  56
    4.2.2 基因特异引物设计  56
    4.2.3 3’-RACE cDNA 的合成  56-58
  4.3 结果与分析  58-62
    4.3.1 总RNA 的提取  58-59
    4.3.2 3’- RACE PCR 扩增结果  59
    4.3.3 Putative Auxin Growth Promotor Protein 基因3’- RACE 序列分析  59-62
  4.4 讨论  62-63
第五章全文结论  63-64
参考文献  64-69
致谢  69-70
作者简历  70-71
项目资助  71

利用抑制差减杂交技术鉴定茄子单性结实相关ESTs

内容摘要

全文目录

相似论文