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扬州鹅PRL基因的序列克隆及其多态性与产蛋性状的关联分析

作　者: 张高娜
导　师: 王志跃
学　校: 扬州大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 扬州鹅 PRL 克隆 序列分析 PCR-SSCP 产蛋性能
分类号: S835
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


催乳素(Prolactin,PRL)又称促乳素或生乳素,是一种蛋白激素。它可抑制垂体促性腺激素的分泌,而使禽类的卵泡发育停止,最终导致停止产蛋,对禽类的产蛋性能具有重要作用。PRL基因常被看作是影响禽类就巢性和产蛋性能的重要候选基因。因此,本试验以扬州鹅作为研究素材,克隆PRL基因的全序列,并对其进行SNP检测。主要结果如下:1、在基因组水平上成功克隆了扬州鹅PRL基因的部分5’侧翼区、外显子1、内含子1、外显子2、内含子2、外显子3、内含子3、外显子4、内含子4、外显子5和部分3’侧翼区等区段的核酸序列,其长度分别为671bp、67bp、1495bp、182bp、413bp、108bp、1389bp、180bp、1894bp、418bp、29bp,序列全长为6846bp。所得序列均已上传至GenBank,基因登录号为GU984377。2、在5’侧翼区发现一个TATA框,14个潜在转录因子结合位点。由于扩增的3’侧翼区较短,所以没有发现AATAAA序列。将PRL基因的CDS序列与马岗鹅、鸭、鹦鹉、鸡的相应序列进行同源性比对,发现其同源性分别为99.7%、98.6%、92.2%、93%;而其编码的蛋白序列与马岗鹅、鸭、鹦鹉、鸡的蛋白序列的同源性分别为99.6%、98.7%、92.2%、93.9%。3、本试验共设计9对引物,采用PCR-SSCP技术检测PRL基因的多态性,并对发现的多态位点分析不同基因型与扬州鹅试验群体产蛋性状的相关性。结果显示:(1)在内含子2上(即在转录起始位点下游1776、1777位点)发生了GA碱基的插入/缺失,导致产生AA、AB和BB三种基因型。经卡方适合性检验,内含子2上的多态位点处于非Hardy-Weinberg平衡状态。该突变位点与扬州鹅产蛋性能的最小二乘分析表明,三种基因型的产蛋量和开产日龄差异不显著(P>0.05),但是不同基因型对应的最小二乘平均值的关系都是BB型﹥AA型﹥AB型。(2)在起始密码子上游+10处,发现一个突变位点。该突变位点是由鸟嘌呤G颠换成胸腺嘧啶T造成的,结果产生了两种基因型:分别为CC型和DD型。经卡方适合性检验,5’调控区的多态位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态。该突变位点与扬州鹅产蛋性能的关联分析表明,CC型群体在一个产蛋周期内的平均产蛋量都极显著高于DD型(P =0.001),CC型群体在开产日龄上也是极显著早于DD型(P =0.001)。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-11
英文缩略词  11-13
前言  13-14
第一章 文献综述  14-26
  1 催乳素的结构和功能  14-19
    1.1 PRL 的基本结构  14-15
    1.2 PRL 的生理功能  15-17
    1.3 PRL 结构与其功能间的关系  17
    1.4 PRL 的分泌调节及其作用方式  17-19
  2 催乳素基因的结构、多态性及其表达调控  19-23
    2.1 催乳素基因的结构  19-21
    2.2 催乳素基因表达的调控  21-22
    2.3 催乳素基因多态性研究进展  22-23
  3 SNPs 的检测方法  23-24
  4 本研究的目的和意义  24-26
第二章 鹅PRL 基因的克隆及序列分析  26-54
  1 实验目的  26
  2 材料与方法  26-36
    2.1 试验动物  26
    2.2 主要仪器设备与试剂  26-28
    2.3 分析软件  28-29
    2.4 鹅血红细胞基因组DNA 的小量提取  29-30
    2.5 引物设计与合成  30-32
    2.6 PCR 扩增  32
    2.7 PCR 产物检测  32
    2.8 PCR 扩增产物的克隆与测序  32-36
    2.9 序列的GenBank 登录  36
  3 结果与分析  36-49
    3.1 PCR 扩增与测序  36-43
    3.2 序列同源性分析  43-45
    3.3 结构预测分析  45-47
    3.4 分子系统进化树的构建  47-49
  4 讨论  49-54
    4.1 鹅PRL 基因结构特点  49-50
    4.2 扬州鹅PRL 基因的蛋白特性及其结构预测  50-54
第三章 鹅PRL 基因多态性与其产蛋性能的关联分析  54-72
  1 实验目的  54
  2 材料与方法  54-58
    2.1 试验动物  54
    2.2 主要仪器设备与试剂  54-55
    2.3 分析工具软件  55
    2.4 鹅血红细胞基因组DNA 的小量提取  55
    2.5 引物设计与合成  55
    2.6 PCR 扩增  55-56
    2.7 PCR 产物检测  56-57
    2.8 SSCP 分析  57-58
  3 统计方法的建立  58-60
    3.1 基因频率和基因型频率的计算  58-59
    3.2 PRL 基因的Hardy-Weinberg 平衡状态的检验  59
    3.3 遗传多态性分析  59-60
    3.4 基因型与鹅的产蛋性能的相关性分析  60
  4 结果与分析  60-68
    4.1 PCR 扩增  60-63
    4.2 SSCP 检测  63-64
    4.3 扬州鹅PRL 基因不同基因型的测序分析  64-65
    4.4 PRL 基因型的Hardy-Weinberg 平衡定律检验  65-67
    4.5 PRL 基因遗传多态性分析  67
    4.6 扬州鹅PRL 基因的不同基因型与其产蛋性状的关联分析  67-68
  5 讨论  68-72
    5.1 扬州鹅 PRL 基因的多态性  68-69
    5.2 扬州鹅 PRL 基因的遗传多样性及其与产蛋性能的关联分析  69-72
结论  72-73
参考文献  73-78
致谢  78-79
攻读学位期间发表的学术论文目录  79

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家禽 > 鹅
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