学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鸡白细胞介素6单克隆抗体的研制与鉴定

作　者: 卢焱炜
导　师: 彭大新；刘秀梵
学　校: 扬州大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡白介素-6 真核表达 原核表达 单克隆抗体 研制
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 45次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


鸡白细胞介素-6 (chIL-6)是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子,是免疫学研究的热点之一。目前,chIL-6的生物学检测主要依赖于淋巴细胞增殖试验或细胞因子依赖性细胞增殖试验,然而,这些试验费时、费力、敏感性低,而且受很多因素如培养物、抑制因子以及其它生长因子的影响。因此,迫切需要一种简单、快速、敏感的chIL-6检测方法。本研究采用chIL-6真核表达质粒作为免疫原,原核表达产物作为筛选抗原,研制出抗chIL-6的单克隆抗体,为建立一种快捷检测chIL-6的方法奠定基础。将含chIL-6基因的质粒(云水丽构建)克隆至真核高效表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA-IL-6重组表达质粒,经双酶切鉴定重组质粒构建正确,用脂质体法将重组质粒转染COS-1细胞,收集细胞上清,利用白介素-6生长依赖细胞株7TD1检测,结果表明细胞上清可促进7TD1细胞的生长,证明pcDNA-IL-6在COS-1细胞中能产生具有生物活性的chIL-6。将chIL-6 cDNA分段克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-IL6-1和pET-IL6-2,重组质粒可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE检测表明,两种表达蛋白以上清的形式存在。以鼠抗chIL-6多抗血清进行Western-blot试验,证明两种蛋白均具有良好的抗原性。将诱导后的工程菌超声波裂解,离心后取上清,采用带HIS标签的蛋白纯化柱子纯化,获得了浓度分别为1.8mg/mL和1.0mg/m L的纯化蛋白。以重组表达质粒pcDNA-IL-6作为免疫原,免疫8周龄的BALB/c小鼠,每只每次肌肉注射100μg,每隔2星期免疫1次,免疫5次后,取小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0-AG-14进行融合。以chIL-6原核表达纯化蛋白作为筛选的抗原,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选。经亚克隆后共获得3株鸡IL-6特异性单抗,分别命名为11E8、15B6和18H9,11E8、15B6两株单抗均属于lgG亚类,18H9单抗属于IgM亚类;腹水的间接ELISA效价分别为:10×214、10×215和10×211。三株单抗以间接免疫荧光法检测pcDNA-IL-6转染COS-1细胞,均产生特异性绿色荧光,其中15B6荧光强度最强。本研究成功构建了表达chIL-6的真核重组质粒和原核重组质粒,并采用真核表达质粒免疫,原核表达产物筛选的方式获得了3株针对chIL-6的单抗,为进一步研究chIL-6的生物学特性及其功能奠定了基础。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
符号说明  10-11
第一章 白介素-6 研究进展  11-22
  1 IL-6 的研究背景  11-13
  2 IL-6 的功能  13-17
  3 IL-6 的应用前景  17-20
  4 IL-6 的生物活性检测  20
  5 IL-6 新型细胞因子重组基因工程疫苗  20-22
第二章 鸡白细胞介素-6 真核表达载体的构建及鉴定  22-29
  1 材料  22-23
  2 方法  23-25
  3 结果  25-28
  4 讨论  28-29
第三章 鸡白细胞介素-6 原核表达载体的构建及鉴定  29-40
  1 材料  29-30
  2 方法  30-34
  3 结果  34-38
  4 讨论  38-40
第四章 鸡白细胞介素-6 单克隆抗体的研制与鉴定  40-49
  1 材料  40-41
  2 方法  41-44
  3 结果  44-47
  4 讨论  47-49
参考文献  49-56
致谢  56

相似论文

  1. 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶（D-AtCGS）基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
  2. 南极冰藻GPx、GST和SAHH基因的克隆、定量分析及原核表达载体的构建,Q943.2
  3. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  4. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  5. 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
  6. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
  7. 小麦黄花叶病毒（WYMV）RNA2编码基因的功能研究,S435.121
  8. 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
  9. 羊种布鲁氏菌16M优势蛋白抗原的鉴定,S852.61
  10. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  11. 猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析及猪α干扰素的真核表达,S858.28
  12. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  13. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  14. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  15. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  16. 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1、N基因的序列分析,S852.65
  17. 猪细小病毒河南流行株的分离、鉴定及部分生物学特性研究,S852.65
  18. 人源β-防御素-6的原核表达及纯化,Q78
  19. 圆眼珍珠蛙（Lepidobatrachus laevis）皮肤cDNA文库的构建、筛选及胰蛋白酶抑制剂的原核表达和活性研究,Q78
  20. 新型菊酯类农药降解酶的生化鉴定及分子改造研究,X172
  21. 抗噻菌灵单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立,S482.2

中图分类: > 生物科学 > 生物工程学（生物技术） > 细胞工程
© 2012 www.xueweilunwen.com