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液相微萃取在中药齐墩果酸和熊果酸分析及其与蛋白结合中的应用研究

作　者: 郝耀梅
导　师: 白小红
学　校: 山西医科大学
专　业: 药物分析
关键词: 分散液液微萃取高效液相色谱富集倍数三萜酸中草药中空纤维溶剂棒微萃取高效液相色谱法齐墩果酸熊果酸药物蛋白结合齐墩果酸和熊果酸
分类号: R917
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

同分异构体的三萜酸化合物齐墩果酸（oleanolic acid, OA）和熊果酸（ursolic acid, UA）具有非常低的紫外吸收，且通常同时存在于同种植物中，二者的同时分离和测定不易。目的：本文利用分散液相微萃取（dispersiveliquid-liquid microextraction, DLLME）结合高效液相色谱法同时萃取和测定中草药枇杷叶和白花蛇舌草中OA和UA的含量，为复杂样品中药有效成分的分离、纯化和浓缩提供一个简便、环境友好的前处理方法。方法：考察了萃取剂种类与体积、分散剂体积、供相pH、离子强度、萃取时间、供相体积、离心转速和时间等因素对DLLME的影响。结果：在优化的条件下，OA和UA得到了良好的萃取效率，富集倍数分别达到1378和933，OA和UA的线性范围分别为0.07%-30.4μg/mL，和0.08%-33.6μg/mL，相关系数均为0.9963；OA和UA的检测限均为0.02μg/mL；平均回收率范围分别在88.2%-116.2％和85.7%-108.2％之间，RSD低于8.6％。结论：该方法能同时萃取和测定白花蛇舌草和枇杷叶样品中的OA和UA，有机溶剂用量少，是一种简便、有效、环境友好的中药复杂成分分析前处理的方法。本文利用中空纤维溶剂棒微萃取（hollow fiber solvent bar microextraction,HFSBME）结合高效液相色谱法(HPLC)用于中草药中两种同分异构三萜酸化合物的浓缩和含量测定。目的：对HFSBME萃取机理进行分析讨论，将其应用于真正样品中齐墩果酸(oleanolic acid,OA)和熊果酸(ursolic acid,UA)的浓缩和含量测定。方法：对HFSBME影响因素进行了选择和优化；与几种萃取模式的萃取结果进行比较并讨论其萃取机理；对HFSBME萃取后分析物的富集倍数和萃取效率及其关系进行定义和推导。结果：在优化的条件下，利用HFSBME结合HPLC对4种中药材样品中OA和UA进行同时萃取、浓缩和含量测定。测得OA和UA富集倍数分别为141.8和47.3；线性范围分别为3.6-1820.0ng/mL和4.2-2080.0ng/mL；检测限为1.3和1.5ng/mL；平均回收率范围分别在93.2%-116.7％和83.3%-114.2％之间。结论：HFSBME结合HPLC可同时、快速的对两种同分异构三萜酸化合物进行浓缩和含量测定，且具有操作简单、快速，灵敏度高、检测限低等特点。本文将中空纤维溶剂棒微萃取（hollow fiber solvent bar microextraction，HFSBME）结合高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）用于药物蛋白结合的研究。目的与方法：HFSBME结合HPLC同时、快速地测定两种同分异构三萜酸齐墩果酸(oleanolic acid, OA)和熊果酸(ursolic acid,UA)与牛血清白蛋白（bovine serum albumin, BSA）和人血清白蛋白（human serumalbumin, HSA）的蛋白结合率，计算并获得相应的结合常数和结合位点数；尝试了药物与结直肠癌细胞HCT116的相互作用，用消炎痛进行了阳性对照实验，得出初步结论。结果：OA和UA与BSA的结合率分别为73.5%和90.9%，结合常数分别为53500和90900，结合位点数均为0.2；与HSA的结合率分别为81.1%和91.0%，结合常数分别为87400和121300，结合位点数分别为0.2和0.1。结论：HFSBME结合HPLC用于药物蛋白结合的测定，方法简单、可靠，为中草药中活性成分的筛选和药效学物质基础的阐明提供了可能的方法。

全文目录

前言  6-8
第一部分液相微萃取技术在中药齐墩果酸和熊果酸分析中的应用  8-52
  Ⅰ分散液相微萃取结合高效液相色谱法同时测定中草药中齐墩果酸和熊果酸的含量  9-31
    摘要  9-10
    Abstract  10-11
    1 引言  11-12
    2 实验部分  12-13
    3 结果与讨论  13-25
    4 结论  25-27
    参考文献  27-31
  Ⅱ 中空纤维溶剂棒微萃取结合高效液相色谱法同时测定中草药中齐墩果酸和熊果酸的含量  31-50
    摘要  31-32
    Abstract  32-33
    1 引言  33-34
    2 实验部分  34-35
    3 方法原理  35-37
    4 结果与讨论  37-45
    5 结论  45-47
    参考文献  47-50
  Ⅲ 分散液相微萃取和中空纤维溶剂棒微萃取结合高效液相色谱法同时测定齐墩果酸和熊果酸含量的方法比较  50-52
第二部分中空纤维溶剂棒微萃取结合高效液相色谱法.在齐墩果酸、熊果酸和蛋白结合中的应用研究  52-70
  摘要  53-54
  Abstract  54-55
  1 引言  55-56
  2 方法原理  56-57
  3 实验部分  57-59
  4 结果与讨论  59-66
  5 结论  66-67
  参考文献  67-70
综述  70-81
  1 引言  70
  2 操作模式  70-72
  3 影响因素  72-74
  4 应用  74-75
  5 展望  75-76
  参考文献  76-81
作者简历  81
硕士学位攻读期间发表论文情况  81-82
致谢  82

液相微萃取在中药齐墩果酸和熊果酸分析及其与蛋白结合中的应用研究

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