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TMEM100在肝细胞癌中的表达及作用的研究

作　者: 华东
导　师: 欧迪鹏
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 肝细胞癌 TMEM100 增殖
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究目的：检测肝癌新鲜组织标本及细胞系中TMEM100的mRNA和蛋白水平表达情况,并分析其在不同增殖能力的细胞系中的表达差异情况,探索其与肝癌发生发展的关系。研究方法：随机抽取中南大学湘雅医院肝癌研究室标本库中肝癌组织标本30对,同时培养正常肝细胞系和四种不同增殖能力肝癌细胞系,利用Real-time PCR、半定量RT-PCR及Western-blotting技术检测TMEM100在上述标本中的表达情况。研究结果：1.组织实验：Real-time PCR结果显示与癌旁相比TMEM100在癌组织中呈低表达；组织的半定量RT-PCR及Western-blotting结果与上述结果一致。2.细胞实验：Real-time PCR结果显示在正常肝细胞株L02中,TMEM100的mRNA表达量明显高于肝癌细胞株；高增殖能力细胞系SMMC-7721和HepG2中TMEM100的表达表达水平极低,且显著低于低增殖能力的细胞系HCCLM3和MHCC97-L中其表达水平；半定量RT-PCR及Western-blotting结果与上述结果一致。3.预后分析：TMEM100高表达组患者生存时间较低表达组长。研究结论：1.TMEM100在肝癌组织中显著低表达提示其表达下调可能与肝癌的发生发展相关,且与肝癌的预后相关,低表达TMEM100的肝癌患者提示预后不良。2.综合分析不同增殖能力的肝癌细胞系中TMEM100的表达情况,我们初步推测TMEM100可能具有抑制肝癌增殖的作用。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
1 前言  9-10
2 材料与方法  10-18
  2.1 主要仪器  10
  2.2 主要材料  10
  2.3 主要试剂  10-11
  2.4. 组织标本的收集及细胞系的获取  11
  2.5. 肝癌患者临床随访研究  11-12
  2.6. 实验方法  12-17
    2.6.1 细胞培养技术  12-13
    2.6.2 肝癌组织标本和细胞株总RNA抽提  13
    2.6.3 总RNA质量鉴定  13-14
    2.6.4 肝癌组织标本和细胞株总蛋白抽提  14-15
    2.6.5 荧光实时定量PCR和半定量PCR  15-16
    2.6.6 SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹  16-17
  2.7. 统计方法  17-18
3 结果  18-23
  3.1. TMEM100在新鲜肝癌组织标本中mRNA和蛋白水平表达情况  18
  3.2. TMEM100在正常肝细胞系及肝癌细胞系中的mRNA及蛋白水平表达情况  18-19
  3.3. TMEM100 mRNA水平表达差异与生存预后的关系  19-23
4 讨论  23-27
5 本实验的创新点  27-28
6 本实验的不足之处  28-29
7 结论  29-30
参考文献  30-33
综述  33-54
  参考文献  43-54
致谢  54

TMEM100在肝细胞癌中的表达及作用的研究

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