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人肺腺癌A549干细胞球和A549细胞系线粒体融合蛋白表达的研究

作　者: 熊吕平
导　师: 叶小群
学　校:
专　业: 内科学
关键词: 肺肿瘤 肿瘤干细胞 球形体 线粒体 线粒体融合蛋白
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一；其转移和复发是治疗的两大难点。既往研究表明，肿瘤干细胞在肿瘤形成、复发、恶性转移和化疗耐药中起重要作用，具有较强的抗凋亡能力。线粒体是细胞凋亡的主要器官，而且线粒体在细胞凋亡中起关键作用。线粒体不断经历着融合和分裂活动改变；研究表明，线粒体融合可加强细胞抗凋亡能力;对正常细胞具有保护作用，对肿瘤细胞则具有抗凋亡能力。但是线粒体融合是否参与肿瘤干细胞的耐药机制，尚缺乏相关的报道。目的：探讨人肺腺癌A549来源的A549细胞球与A549细胞系线粒体融合表达的差异性。方法：采用无血清培养基（serum-free medium，SFM）的方法培养出人肺腺癌A549细胞的肿瘤干细胞，再诱导A549细胞球体的形成；最后使用实验方法RT-PCR和Western blotting检测人肺腺癌A549肿瘤干细胞球和人肺腺癌A549细胞系的线粒体融合蛋白（Mfn1、Mfn2、OPA1）表达。结果：人肺腺癌A549细胞球和细胞系Mfn1蛋白的mRNA和蛋白表达水平分别为(0.16±0.04)和(0.29±0.04)；p<0.05；两组细胞Mfn2mRNA和蛋白表达分别为(0.16±0.03)和(0.28±0.09)；P<0.05；两组细胞OPA1mRNA和蛋白表达分别为(0.13±0.04)和（0.39±0.05；P <0.05。结论：1、人肺腺癌A549来源的A549细胞球的线粒体融合蛋白（Mfn1、Mfn2、OPA1）表达比A549细胞系表达增高。2、推测人肺腺癌A549来源的A549细胞球的线粒体融合过程可能参与肿瘤干细胞耐药的机制。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第1章 引言  9-12
第2章 材料与方法  12-24
  2.1 实验材料  12-16
    2.1.1 实验细胞株  12
    2.1.2 主要试剂及来源  12-13
    2.1.3 主要仪器和设备  13-14
    2.1.4 主要试剂配制  14-16
  2.2 实验方法  16-23
    2.2.1 细胞的培养及分组  16-17
    2.2.2 RT-PCR 法检测两组细胞的 Mfn1、Mfn2、Opa1 蛋白表达  17-20
    2.2.3 蛋白免疫印迹法检测两组细胞的线粒体融合蛋白 Mfn1、Mfn2、Opa1 的蛋白表达  20-23
  2.3 统计方法  23-24
第3章 结果  24-31
  3.1 人肺腺癌 A549 细胞及 A549 细胞球培养的形态观察  24-25
  3.2 RT-PCR 法检测结果  25-28
    3.2.1 RT-PCR 方法检测两组细胞线粒体融合蛋白 Mfn1 mRNA 表达  25-26
    3.2.2 RT-PCR 方法检测两组细胞线粒体融合蛋白 Mfn2 mRNA 表达  26-27
    3.2.3 RT-PCR 方法检测两组细胞线粒体融合蛋白 OPA1 mRNA 表达  27-28
  3.3 蛋白免疫印迹法检测结果  28-31
    3.3.1 蛋白免疫印迹法检测两组细胞线粒体融合蛋白 Mfn1 蛋白表达  28-29
    3.3.2 蛋白免疫印迹法检测两组细胞线粒体融合蛋白 Mfn2 蛋白表达  29-30
    3.3.3 蛋白免疫印迹法检测两组细胞线粒体融合蛋白 OPA1 蛋白表达  30-31
第4章 讨论  31-36
  4.1 肿瘤干细胞耐药机制  31-32
  4.2 线粒体融合的研究进展  32-34
  4.3 肺癌干细胞研究进展及干细胞面临的挑战  34-35
  4.4 实验思路和方法的完善  35-36
第5章 结论与展望  36-37
  5.1 结论  36
  5.2 展望  36-37
致谢  37-38
参考文献  38-41
攻读学位期间的研究成果  41-42
综述  42-50
  参考文献  47-50

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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