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RNAi沉默MACC1基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的实验研究

作　者: 蒋国燕
导　师: 张献全
学　校: 重庆医科大学
专　业: 急诊医学
关键词: MACC1 siRNA MCF-7 细胞增殖细胞迁移
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 33次
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内容摘要

目的：化学合成针对结肠癌转移相关基因1(metastasisassociated in colon cancer1， MACC1)的小干扰RNA （smallinterfering RNA，siRNA），将其转染人乳腺癌细胞株MCF-7，观察MACC1表达受抑制后，结肠癌转移相关基因1（MACC1)对MCF-7细胞的增殖、迁移以及迁移相关蛋白S100A4和vimentin的影响。方法：(1)将MACC1基因设计3个干扰序列和1个阴性对照序列。(2)将3对MACC1-siRNA和1对阴性对照siRNA（negative controlsiRNA，NC-siRNA）转染体外培养的MCF-7细胞，转染48h后采用RT-PCR检测MACC1mRNA的表达，将干扰效率最高的MACC1-siRNA用于后续实验。(3)实验分为3个组别：CON组（MCF-7空白对照组），NC组（MCF-7转染阴性对照的siRNA）和siRNA组（MCF-7转染目的siRNA）。(4)采用MTT法观察3组细胞的增殖状态。(5)Transwell迁移实验检测3组细胞的迁移能力。（6）Western blot检测迁移相关蛋白S100A4和vimentin的表达。结果：（1）MACC1基因在乳腺癌MCF-7细胞高表达。(2)倒置荧光显微镜显示各转染组细胞发出绿色荧光，当siRNA转染试剂（ul）：siRNA（ug）为5：1时，MCF-7细胞转染的效率最高，达85%以上。RT-PCR电泳结果显示：MACC1-siRNA1-3组MACC1mRNA较正常对照组，表达水平分别下降了80.6%、31.8%、27.2%，提示MACC1-siRNA1的干扰效率最高。（3）针对MACC1基因的siRNA转染MCF-7细胞48h后，siRNA组与空白对照组比，能够显著抑制MACC1蛋白合成，抑制效率为75%。（4）MACC1特异性siRNA转染MCF-7细胞24、48、72h后，MTT结果显示与空白对照组比较，siRNA组能够抑制细胞生长，并随着时间延长效果显著（P＜0.05），将阴性对照组和空白对照组比，两组的差别无统计学意义（P＞0.05）。（5）转染MCF-7细胞48h后，Transwell迁移实验结果显示siRNA组与空白对照组比较，穿过小室细胞数明显降低，其能有效抑制MCF-7细胞迁移（P＜0.05），将空白对照组和阴性对照组比，差异无统计学意义（P＞0.05）。（6）siRNA组与空白对照组相比，迁移相关蛋白S100A4和vimentin表达降低（P＜0.05），将空白对照组和阴性对照组比较，两组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论(1)针对MACC1基因特异性siRNA抑制靶基因表达效果显著；(2)干扰MACC1基因表达后，MCF-7细胞的增殖受到明显抑制，并且其迁移能力也明显降低；(3)MACC1基因特异性siRNA能够抑制Wnt/β-catenin信号通路中关键的转录因子S100A4，并降低MCF-7细胞中间质标志物vimentin的表达。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
1.材料与方法  12-20
2.结果  20-22
3.讨论  22-24
全文总结  24-25
参考文献  25-27
附图  27-29
文献综述  29-39
  参考文献  34-39
致谢  39-40
攻读硕士学位期间发表的文章  40-41

RNAi沉默MACC1基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的实验研究

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