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Runx3对CD36基因表达调控的研究
作 者: 王岭会
导 师: 刘文广
学 校: 东北师范大学
专 业: 细胞生物学
关键词: RUNX3 黑色素瘤 抑制细胞迁移 CD36
分类号: R730.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
现在研究显示,RUNX家族成员在正常发育过程以及致癌作用中都发挥重要作用,其家族成员RUNX3转录因子与背侧神经发生,T细胞分化以及肿瘤发生密切相关。近期的研究发现RUNX3是胃癌,肺癌,胰腺癌等许多癌症的肿瘤抑制基因,在这些癌症内RUNX3主要通过等位基因杂合性缺失或者启动子区甲基化的方式失活。RUNX3转录因子是TGF-β信号途径的下游效应基因,可能通过TGF-β信号途径来调节细胞增殖,细胞凋亡,细胞粘附和迁移等活动。RUNX3与胃癌的研究比较透彻,但是关于RUNX3对黑色素瘤影响的研究较少,不过根据RUNX3在其他癌症中的作用可以推测RUNX3在黑色素瘤内应该也发挥肿瘤抑制基因的作用。为了研究RUNX3对黑色素瘤的影响,我们向鼠黑色素瘤细胞系B16F10内转染了RUNX3基因,使原本不表达RUNX3的B16F10细胞表达了外源RUNX3基因。与空载相比,转染RUNX3基因后的B16F10的细胞形态发生改变;并且通过细胞划痕实验发现,表达RUNX3基因的B16F10细胞迁移速率较慢,这说明RUNX3基因能抑制黑色素瘤细胞的迁移。RT-PCR分析了B16F10细胞内的整联蛋白亚基β1、β3,CD47这些与细胞迁移相关基因的表达情况,发现RUNX3的高表达并不影响这些基因的表达;但是高表达RUNX3的B16F10细胞内CD36基因的表达受到抑制。CD36是B类清道夫受体家族成员,它是跨膜糖蛋白受体,在很多细胞表面都有表达如在血小板,毛细血管内皮细胞,巨噬细胞的表面。CD36作为细胞表面受体可以与不同配体如脂蛋白质,丝氨酸磷脂,血小板反应蛋白-1(Tsp-1)等配体结合发挥不同的功能。毛细血管内皮细胞上的CD36与Tsp-1结合可以促使血管内皮细胞凋亡以及调节血管发生。有研究发现CD36可以改变整联蛋白的分布,从而改变黑色素瘤细胞的运动性,促进黑色素瘤细胞的迁移,由此可见CD36可以影响肿瘤的转移和侵袭。在我们的实验中发现RUNX3抑制B16F10的迁移速率,并且对CD36基因表达起负调控作用,这显示RUNX3可能通过负调控CD36基因的表达来抑制黑色素瘤细胞系B16F10的迁移。
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全文目录
中文摘要 4-5 英文摘要 5-8 引言 8-15 1 Runx3 基因 8-10 1.1 Runt 基因家族 8 1.2 Runx3 基因研究现状 8-10 2 与肿瘤转移相关的基因 10-15 2.1 整联蛋白 11-13 2.1.1 整联蛋白β1亚基与β3亚基 12-13 2.2 CD36 13 2.3 CD47 13-15 材料与方法 15-18 1 实验材料 15 1.1 实验材料 15 1.1.1 细胞株 15 1.1.2 主要试剂 15 1.2 主要实验仪器及器材 15 2 实验方法 15-18 2.1 细胞培养 15 2.2 向鼠黑色素瘤细胞B16F10 转染neo 空载和RUNX3 质粒 15-16 2.3 检验稳转株内的RUNX3 的mRNA 和蛋白水平 16 2.4 观察RUNX3 表达与否对黑色素瘤细胞B16F10 细胞形态的影响 16 2.5 细胞划痕实验检验RUNX3 对黑色素瘤细胞B16F10 迁移的影响 16-17 2.6 RT-PCR 分析RUNX3 的高表达对某些肿瘤转移基因的影响 17-18 结果与分析 18-22 1 B16F10 稳转细胞株 18-19 1.1 neo 空载株以及RUNX3 高表达株的建立 18 1.2 RT-PCR 分析RUNX3 的mRNA 水平 18 1.3 免疫荧光分析RUNX3 蛋白的的表达情况 18-19 2 neo 空载及RUNX3 高表达细胞株的细胞形态差异 19-20 3 细胞划痕实验 20 4 RT-PCR 分析与迁移有关的基因 20-22 讨论 22-24 结论 24-25 参考文献 25-30 致谢 30
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
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