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c-Abl激酶对整合素αvβ3介导的肿瘤细胞迁移的作用研究

作　者: 杨超
导　师: 曾宪录
学　校: 东北师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 细胞迁移 αvβ3整合素 c-Abl激酶蛋白质相互作用
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

肿瘤细胞的浸润和转移是癌症高致死率的主要原因,而细胞浸润和转移的基础是细胞迁移。另外,胚胎发育、炎症反应、组织修复等也离不开细胞的迁移。整合素作为细胞膜上的粘附分子,一方面通过胞内结构域能够与胞内的细胞骨架结合在一起,另一方面通过胞外的球状结构域能够与细胞外基质连接在一起,从而使细胞锚定在细胞外基质上。另外,整合素还能够整合细胞内外的信号从而调节细胞的迁移,所以整合素对于细胞是迁移是非常关键的。c-Abl激酶作为细胞内的非受体酪氨酸激酶能够使许多蛋白分子磷酸化,激活相应的靶分子、调控细胞骨架的重组或基因的表达,从而参与细胞的凋亡、分化、衰老等多种生理过程,同样有研究报道它参与了细胞的迁移过程。在本实验中,我们通过transwell实验发现c-Abl激酶参与了αvβ3整合素介导的A375细胞的迁移,并且通过免疫荧光双标记实验和免疫共沉淀实验证明了c-Abl激酶与αvβ3整合素存在于同一个蛋白复合体中。我们进一步构建了c-Abl与其它蛋白相互作用关键结构域的GST融合蛋白,通过GST-pμll down实验证明了c-Abl激酶是通过它的SH3结构域与αvβ3整合素形成复合体的。本研究结果为进一步探讨c-Abl与αvβ3整合素的动态变化影响细胞迁移的机制奠定了基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-8
引言  8-19
  一、肿瘤细胞的转移与迁移  8-9
    （一）肿瘤细胞的转移  8-9
    （二）肿瘤细胞的迁移  9
  二、整合素  9-15
    （一）整合素的分类  9-10
    （二）整合素的结构  10-11
    （三）整合素配体  11-12
    （四）整合素与细胞迁移  12-15
  三、c-Abl激酶  15-18
    （一） c-Abl的结构及在细胞内的定位  15-16
    （二） c-Abl的活化  16-17
    （三） c-Abl的生理功能  17-18
  四、本论文的研究内容和意义  18-19
材料与方法  19-27
  一、实验材料  19-22
    （一）细胞、菌株、质粒及抗体  19
    （二）试剂和酶类  19
    （三）培养基和主要溶液  19-21
    （四）主要仪器设备  21-22
  二、实验方法  22-27
    （一）细胞的培养及冻存  22
    （二） Transwell肿瘤细胞迁移实验  22
    （三）免疫荧光双标记实验  22-23
    （四）免疫共沉淀实验  23
    （五）质粒的构建  23-25
    （六） GST-pμll down assay  25-27
结果与分析  27-33
  一、c-Abl激酶可能参与αvβ3整合素介导的A375细胞的迁移  27-28
  二、c-Abl激酶与αvβ3整合素存在于同一个蛋白复合体中  28-29
  三、质粒的构建  29-31
  四、c-Abl激酶通过SH3结构域与αvβ3整合素形成复合体  31-33
讨论  33-35
  一、c-Abl激酶可能参与了αvβ3整合素介导的A375细胞的迁移过程  33
  二、c-Abl激酶与αvβ3整合素存在于同一个复合体当中  33-34
  三、c-Abl激酶通过SH3结构域与αvβ3整合素形成复合体  34-35
结论和主要创新点  35-36
参考文献  36-41
致谢  41

c-Abl激酶对整合素αvβ3介导的肿瘤细胞迁移的作用研究

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