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纳米颗粒扩增金标试纸条的研究与应用

作　者: 李蓓蓓
导　师: 杨屹
学　校: 北京化工大学
专　业: 化学
关键词: 胶体金免疫层析法信号扩增
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

分子水平的生物学定量检测需要更先进的生物分析方法。近年来在医学、动物检验、食品卫生检验等研究领域中,快速、灵敏、准确的分析方法在检测细菌、病毒和农兽药残留上得到了很广的发展应用。胶体金免疫层析是一种简单、快速的免疫学检测技术,利用金标抗体与抗原的特异反应进行检测。这种方法也广泛地应用在禽畜类疾病的监测诊断中,例如对禽流感病毒、新城疫病毒及牛病毒性腹泻病毒的诊断。胶体金技术比荧光免疫,放射性免疫及酶联免疫法的检测灵敏度低,如果可以使金颗粒扩增,就能实现肉眼可见检测,提高灵敏度。本研究基于胶体金免疫层析法原理,并探索形成了纳米颗粒扩增胶体金免疫层析试纸条制备的技术体系。利用增敏辅助试剂的化学反应使固定在硝酸纤维素膜上的胶体金抗体抗原反应复合物的颗粒原位增长,让胶体金原位所形成的纳米颗粒染色,使金标信号显著增强,提高了检测灵敏度。首先利用金颗粒对蛋白质分子吸附的功能,将一种单克隆抗体与胶体金颗粒结合制备免疫检测探针,然后在硝酸纤维素膜上,喷上包被抗体作为检测线(T线)和羊抗鼠抗体作为质控线(C线)。将被检样品加到样品垫上,样品会沿NC膜流向吸水垫,样品中检测物浓度大于检出限时,金标抗体抗原结合物与固定在T线上的抗体结合,T线显色,呈阳性；样品中检测物浓度小于检出限时,T线不显色,结果为阴性。在增敏步骤中,将一定浓度的氯金酸和抗坏血酸或盐酸羟胺按一定比例混匀(参考专利：200810106529.6),滴加NC膜上进行金颗粒扩大,检测倍数可提高10～100倍。同时,利用紫外可见吸收光谱,透射电子显微镜,商业试纸条的对照测试,交叉性实验等来验证方法的可行性与稳定性。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
符号说明  8-13
第1章文献综述  13-29
  第1.1节禽流感病毒与新城疫病毒的研究进展  13-20
    1.1.1 NDV和AIV的生物学特性  13
    1.1.2 NDV和AIV检测技术研究进展  13-20
  第1.2节免疫胶体金检测技术研究进展  20-27
    1.2.1 免疫胶体金技术简介  20-21
    1.2.2 免疫胶体金的制备  21-24
    1.2.3 免疫胶体金检测技术及其应用  24-26
    1.2.4 免疫胶体金检测技术的优点  26-27
  第1.3节本课题的研究目的和意义  27-28
  第1.4节本课题的总体研究思路  28-29
第2章研究内容-纳米颗粒扩增金标试纸条的研制  29-39
  第2.1节材料与方法  29-39
    2.1.1 材料  29-31
    2.1.2 方法  31-39
第3章结果与讨论  39-53
  第3.1节胶体金颗粒的鉴定  39-40
  第3.2节抗体的浓度测定值  40
  第3.3节抗体与胶体金结合的最佳浓度的确定  40-42
    3.3.1 目测法  41
    3.3.2 OD值法  41-42
  第3.4节金标探针的纯化与浓缩  42
  第3.5节试纸条的增敏  42-44
    3.5.1 增敏试剂的优选  43-44
    3.5.2 展开剂的优选  44
  第3.6节病毒血凝实验结果  44-45
  第3.7节试纸条敏感性实验  45-46
  第3.8节试纸条重复性实验  46-47
  第3.9节试纸条特异性实验  47-49
  第3.10节 ELISA对照实验  49
  第3.11节稳定性实验  49
  第3.12节商品化试纸条验证实验  49-53
第4章总结  53-54
参考文献  54-58
致谢  58-59
研究成果及发表的学术论文  59-60
作者和导师简介  60

纳米颗粒扩增金标试纸条的研究与应用

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